以鲤为材料,采用HotSHOT法的改进方法快速提取鲤基因组DNA。通过eppendorf分光光度计测定 OD260/OD280值、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示改进方法能获得较高质量的基因组DNA，该基因组DNA可用于常规PCR 扩增,均能得到PCR扩增的特异条带。改进HotSHOT的方法更加快速,简便而且成本低廉。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1□材料与方法1
1.1□实验材料 1
1.2□实验方法 2
1.2.1□配置DNA提取试剂2
1.2.2□利用本法提取鳞片和鳍条DNA2
1.2.3□采用试剂盒提取DNA2
1.2.4□DNA样品质量浓度和纯度测量2
1.2.5□DNA样品的扩增2
1.2.6□DNA样品的扩增条带2
1.2.7□DNA提取方法的探讨实验2
1.2.8□结果分析3
2□结果与分析3
2.1□不同提取方法的耗时和费用3
2.2□DNA样品质量浓度和纯度3
2.3□DNA提取方法的探讨实验3
2.3.1□不同样本量的影响3
2.3.2□样本加热时间的影响4
2.3.3□样品粉碎的影响5
3□讨论 6
3.1□方法优势 6
3.2□DNA质量浓度和纯度 7
3.3□DNA提取方法的探讨 7
致谢7
参考文献7
从鲤鱼鳍条或鳞片中快速提取DNA方法的研究
引言
引言 DNA可用于鱼类遗传多样性的研究，如分子标记的开发[1]，也可以用于鱼类的抗病毒基因的克隆和功能研究[2]。鱼类血液、肌肉、鳞片、鳍条均能提取DNA，并且现今提取DNA的方法众多[3]。如今采用试剂盒抽提DNA，方法步骤复杂，并且成本较高。所以本法在国外快速提取小鼠的DNA的方法（HotSHOT）基础上[4]，对其进行改进建立一种快捷、简单的鱼类DNA提取方法，它较现行的DNA试 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
剂盒抽提方法，用本法提取的DNA，速度快，成本低。
材料与方法
实验材料
从淡水渔业研究中心实验基地选取活力正常的鲤，采集鳞片与尾鳍。PCRmix为TRANS生产的2×EasyTaq PCR SuperMix(+dye)。碱性裂解溶液的药品为NaOH、 EDTANa2，中和溶液的药品TrisHCl。DNA提取试剂盒为OMEGA公司生产。扩增产物为微卫星位点1163，其它序列为（引物F:TGGACTGTTAAAGAAGGGTATGTG；引物R：TGCTTGGGTACTGGATGAAC）。
实验方法
配置DNA提取试剂 配置200mL碱性裂解溶液（NaOH 200mg、EDTA 14.88mg），此法制备碱性裂解溶液不需要调整PH，PH为12，其中25mM NaOH，0.2mM EDTANa2；配置200mL中和缓冲溶液（TrisHCl 1.3g），制备出中和缓冲溶液为40mM TrisHCl，pH为5。
利用本法提取鳞片和鳍条DNA 取2片鳞片于1.5mL EP管，取20mg鳍条于另一EP管，加入75μL碱性裂解溶液，放入95℃水浴锅30min，然后将样品置于4℃冰水浴冷却，立即加入中和缓冲溶液75μL，制得最终制剂，并测量OD值保存至20℃。
采用试剂盒提取DNA 采用OMEGA 试剂盒，按照说明书对鲤鱼血液DNA进行提取：
(1)将样品转移到1.5mL离心管中，加入10mM Elution Buffer将样品体积调整至250μL；
(2)加入25μL OB Protease Solution和250μl BL Buffer，涡旋混匀；
(3) 70℃孵育10min，期间取出涡旋混匀一次；
(4) 加入250μl无水乙醇，涡旋混匀；
(5) 将HiBind ® DNA结合柱套在2mL收集管中，将第4步得到的所有溶解液转入 HiBind ® DNA结合柱中，以最大速度10,000转/min离心以结合DNA，弃滤液；
(6) 将HiBind ® DNA结合柱套在2mL收集管中，加入500μl HBC Buffer，最大速度离心30s，弃滤液；
(7) 将HiBind ® DNA结合柱套在新的2mL收集管中，加入700 µl DNA Wash Buffer 至HiBind ® DNA结合柱中，最大速度离心30s，弃滤液；
(8) 重复步骤7，用DNA Wash Buffer进行二次洗涤；
(9) 将HiBind ® DNA 结合柱套在同一个2mL收集管中，最大速度离心空甩2min以干燥HiBind ® DNA结合柱的基质。
(10) 将HiBind ® DNA结合柱套在新的1.5mL灭菌离心管，加入50200μl预热至 70℃ Elution Buffer至HiBind ® DNA结合柱的膜中央。室温静置2min；
(11) 室温下，最大速度离心1min，以洗脱DNA。
(12) 重复步骤 1011；
(13) 将洗脱的DNA保存至20℃。
DNA样品质量浓度和纯度测量 用eppendorf分光光度计测定，记录OD260nm和OD280nm的吸光光度值，计算出DNA质量浓度，单位μg/mL，DNA纯度以OD260/OD280表示，纯度(OD260/OD280)应在标准的1.8～2.0 。

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/scyz/564052.html