Wnt2和wnt4是wnt基因家族的重要成员，在多种生物学过程中发挥重要功能。本研究通过将NCBI中的人、小鼠和斑马鱼的wnt基因序列与福瑞鲤的转录组数据库对比获得福瑞鲤wnt2和wnt4基因mRNA序列，运用实时荧光定量PCR分析wnt2和wnt4在福瑞鲤不同胚胎发育时期的表达情况。结果表明福瑞鲤wnt2和wnt4基因在整个胚胎发育过程中都有表达，且在受精卵时期表达量都显著高于其他胚胎发育时期（P＜0.05）;此外，wnt2表达量在8细胞期、囊胚期和神经胚期显著高于除受精卵期外的其他时期，提示wnt2可能参与福瑞鲤胚胎发育过程早期的营养转化和之后的器官发生过程；wnt2在黑色素期表达量还明显高于原肠胚期、肌肉效应期、耳石期、心跳期、出膜前期和出膜期，表明wnt2可能与福瑞鲤眼部发育有关。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1福瑞鲤不同胚胎发育时期样品2
1.2福瑞鲤wnt2和wnt4基因核苷酸序列的获取2
1.3实时荧光定量PCR2
1.4数据与统计3
2结果与分析3
2.1wnt2在福瑞鲤不同胚胎发育时期的表达状况3
2.2wnt4在福瑞鲤不同胚胎发育时期的表达状况4
3讨论 5
致谢6
参考文献6
福瑞鲤不同胚胎发育时期wnt2和wnt4基因表达特性研究
水产养殖 唐智慧
引言
鲤鱼在动物学分类上属于脊索动物门，硬骨鱼纲，鲤科。鲤鱼是温带性淡水鱼，原产于亚洲，喜欢生活在平原的湖泊或水流缓慢的河流，在我国分布广泛，种类众多，可作为观赏鱼或食用鱼。近年来通过杂交、选育等育种技术培育了多种新型食用鲤鱼，其中包括中国水产科学研究院淡水渔业研究中心培育出的福瑞鲤[1]。福瑞鲤是以建鲤和黄河鲤为原始亲本，经1代群体选育和连续4代BLUP家系选育而获得的水产养殖新品种，它整体呈梭形，背高体宽头小，口亚下位，全身覆盖较大的圆鳞，背部常呈现青灰色，外形优美，很受山东、河南等主要消费市场欢迎。福瑞鲤优点明显，生长快速、饲料 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
转化率高、适应能力强和遗传性状稳定等特点[2]。
Wnt基因家族最早于1982年由Nusse等[3]首次报道，当时称int基因，是由小鼠乳腺癌病毒中克隆所得的一个原癌基因。之后有学者发现果蝇的无翅基因wingless与int具有很高的同源性，后来将其合称wnt。Wnt信号通路最先因其在癌变中的功能被鉴定，这一通路在临床中研究较多。目前已知有3条wnt信号通路：经典wnt通路，非经典wnt细胞极性通路和非经典wnt钙离子通路。所有3条 wnt 信号通路均是由wnt蛋白的配体结合至Frizzled家族受体而激活，随后将生物信号传递至胞内的Dishevelled蛋白，该通路从果蝇到人类在进化上都高度保守[4]，不论是低等无脊椎动物还是高等脊椎动物，均被发现wnt基因家族的存在。Wnt功能具多样性,突变会导致发育的畸变，能调节细胞的自我更新以及粘液免疫过程，在胚胎发育过程中对细胞的增殖、分化、迁徙、极性和凋亡均起到重要的作用。Wnt2和wnt4同属wnt基因家族的成员，参与多种生命活动，也是研究者们重要的研究对象。Wnt2是wnt信号通路的启动分子，通过激活经典的βcatenin发挥重要作用，目前研究发现wnt2在多种肿瘤组织中处于高表达状态，与肿瘤的发生发展有着密切的关系[5]。葛雅男[6]通过免疫组化法研究了wnt2在喉鳞状细胞癌及周边正常组织中的表达，发现wnt2在喉癌组织中的表达率显著高于周围正常组织，认为wnt2可能参与癌的发生并会促进喉癌的发展。崔雄等[7]研究了wnt2在人乳腺癌组织中的表达，发现乳腺癌患者wnt2含量显著高于健康之志愿者，癌组织中的wnt2阳性细胞率、染色强度、IHC评分均高于周围健康组织。也有一些研究者的研究表明wnt2基因与胚胎发育相关，如原冬伟等[8]研究了wnt2在奶牛胚胎发育过程中表达情况，发现wnt2富集在子叶中尤其是子叶滋养层细胞上，由此认为wnt2在奶牛的胚胎发育过程中起着重要作用。MCCAULEY等[9]研究发现wnt2在海星的中胚层、前内胚层中有表达。MILLER等[10]的研究表明wnt2与自内胚层发育而来的器官形成有关。而KATOH[11]的研究也指出wnt2在人胎肺、胎肾及胎盘中有，在成人的胃肠道中却没有表达。wnt4与糖蛋白分泌相关，是wnt家族中调节有机体发育过程的重要基因，很多研究者认为wnt4与生物的性别决定有密切关系。李俊[12]研究了wnt4在大鲵性腺中的表达状况，卵巢中的高度表达和精巢中几乎不表达形成鲜明对比，认为wnt4基因参与调节了大鲵的卵巢发育。李海龙等[13]研究了wnt4在栉孔扇贝不同组织中的表达状况，发现其在成熟期的精巢和卵巢中表达量最高，并且在精巢中的表达量高于卵巢。李红飞[14]的研究指出wnt4调节日本吸血虫的表皮生长，从而影响雌虫的产卵过程。姬晓琳[15]对黄河鲤wnt4基因J进行了克隆并分析了wnt4在黄河鲤体内的表达状况，发现其在原肠胚时期和出膜后5天出现高表达，并且在发育过程中在肝脏中的表达量高于性腺及其他组织，但在性腺的不同发育时期内都存在wnt4的表达，且在成熟期的性腺中表达最高，这表明wnt4在生殖细胞的成熟过程中扮演重要角色。wnt4在肾的发育上也起着重要作用。孔静等[16]的研究发现糖尿病肾病大鼠肾组织中wnt4表达量明显高于正常大鼠，李圆圆等[17]的研究也指出wnt4/βcatenin信号通路的活化会促进肾病大鼠的肾脏纤维化。
Wnt基因已经在多种脊椎动物中展开研究，不同wnt基因在不同的动物身上所发挥的作用也不尽相同，但是目前还没有人研究过wnt2和wnt4在福瑞鲤胚胎发育过程中的表达状况，本实验通过分析wnt2和wnt4基因在福瑞鲤胚胎发育不同时期的表达特性，为深入研究wnt基因的生物学功能奠定基础。

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