目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1 文献综述4
1.1 红光和远红光感光器的结构基础4
1.2 红光和远红光信号机制5
1.3 红光刺激与真菌细胞中其他调控通路的互作6
1.4 目前存在问题6
1.5 本实验研究任务6
2 方案论证7
2.1 方案原理7
2.2 方案内容7
2.3 理由及特点8
3 材料与方法8
3.1 实验材料 8
3.1.1试验菌株 8
3.1.2实验培养基8
3.1.3主要实验仪器9
3.2 金针菇 FphA的生物信息的预测9
3.2.1 金针菇 FphA蛋白的基本特性分析9
3.2.2 金针菇 FphA蛋白的亚细胞定位，跨膜结构分析和疏水性分析9
3.2.3 金针菇 FphA蛋白的二级和三级结构的预测和对结构域的分析9
3.2.4 金针菇 FphA蛋白的系统进化树分析9
3.3 构建金针菇 FphA 基因沉默型菌株9
3.3.1 金针菇总 RNA 的提取和 cDNA 的制备9
3.3.2 设计引物10
3.3.3 PCR扩增目的片段10
3.3.4 PCR 产物回收11
3.3.5 PCR 产物 TA 连接11
3.3.6 大肠杆菌 DH5α感受态细胞制备11
3.3.7 热激转化12
3.3.8 碱裂法提取质粒12
3.3.9 酶切与回收13
3.3.10 沉默基因与沉默载体酶连13
3.3.11 转化与测序14
3.3.12 分装保存菌液与质粒14
3.3.13 金针菇原生质体制备、脂质体转化14
3.4 金针菇生物量和精氨酸、赖氨酸、水溶蛋白含量的测定14
3.4. *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: &351916072& 
1 金针菇生物量重量的测定14
3.4.2 金针菇精氨酸和赖氨酸含量的测定15
3.4.3 金针菇水溶蛋白含量的测定15
4 结果与分析16
4.1 金针菇FphA蛋白的基本理化性质分析16
4.2 金针菇 FphA蛋白的亚细胞定位，跨膜结构分析和疏水性分析16
4.3 金针菇 FphA蛋白的二级和三级结构的预测和对结构域的分析17
4.4 金针菇 FphA蛋白的系统进化树18
4.5 金针菇 FphA 基因沉默载体的构建19
4.5.1 PCR扩增获取FphA 基因19
4.5.2 将FphA基因转化进入大肠杆菌19
4.5.3 提取质粒，将pmi沉默载体和质粒进行相同的双酶切，形成相同黏性末端19
4.5.4 酶切成功的基因片段和沉默载体酶连后，转化验证结果20
4.5.5 转化后测序结果20
4.5.6 脂质体转化金针菇原生质体20
4.6 野生型金针菇在发酵实验中精氨酸、赖氨酸和水溶蛋白含量的测定21
4.6.1 绘制标准曲线21
4.6.2 野生型菌株在常温和低温环境下精氨酸、赖氨酸和水溶蛋白含量的变21
5 讨论22
5.1 生物学预测结果的合理性22
5.2 温度对蛋白FphA表达的调控，对精氨酸、赖氨酸、水溶蛋白和生物量的影响22
5.3 实验展望23
6 参考文献23
7 致谢26
8 附录27
9 获得学术成果29金针菇中红光受体蛋白FphA的基因克隆和生物信息预测及低温环境对特定氨基酸的调控作用
摘要
为探究温度对红光受体蛋白FphA在金针菇在精氨酸、赖氨酸，蛋白和生物量含量的影响，我们先对金针菇FphA基因进行了基本理化性质的预测，包括亚细胞定位，跨膜结构和疏水性的预测，并对其结构域和二级三级结构进行了预测分析同时构建了系统进化树。之后成功克隆出FphA基因并完成了沉默载体的构建，转化进金针菇原生质体利用三种抗性筛选出转化子，待后续沉默效率筛选、验证。用温度做对照，研究低温通过影响FphA基因表达对精氨酸，赖氨酸和水溶蛋白及生物量含量的影响。结果显示，金针菇FphA基因编码蛋白拥有具光敏蛋白特征的感知结构域：PAS、GAF和PHY结构域，为光敏蛋白家族的一员。在对FphA的亚细胞定位预测中，存在于质膜的可能性最高，无跨膜结构，为亲水蛋白，构建的系统进化树中与裂褶菌亲缘最近。与常温对照相比，低温诱导下精氨酸含量显著变化，下降32.8%。结果说明，相较常温环境，低温环境下精氨酸含量显著降低，而赖氨酸，水溶蛋白和生物量则无明显差异。

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/606498.html