为探究猪链球菌2型强毒株SS2-1支链氨基酸转氨酶的编码基因ilve对细菌毒力的影响，本研究利用同源重组技术构建了猪链球菌2型ilve缺失株，命名为SS2-1△ilve。通过比较缺失株与亲本株在形态、应激条件下的存活率、对小鼠的感染性及致病性的差异来观测ilve缺失前后细菌致病性的变化。结果显示，与亲本株相比，缺失株在革兰染色形态上无明显差异；在终浓度为40 mmol/L的H2O2环境中，相对存活率降低了26.2%；而在pH=5的THB液体培养基中，相对存活率升高了9%；在竞争感染试验中，小鼠体内的活菌数有显著减少，其中血中减少100.96 CFU，脾中减少102.884 CFU，脑中减少103.2 CFU；在致病性试验中，感染缺失株的小鼠死亡率降低了70%。综上，本研究结果表明ilve基因的缺失降低了SS2-1的致病性。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key words 3
引言 4
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.1.1 质粒、菌株和实验动物 4
1.1.2 引物 4
1.1.3 主要试剂 5
1.1.4 仪器 5
1.2 方法 5
1.2.1 ilve基因的原核表达 5
1.2.2 基因缺失株SS21△ilve的构建 6
1.2.3 缺失株生物学特性分析 7
2 结果 8
2.1 ilve基因的原核表达 8
2.1.1 ilveORF的扩增 8
2.1.2 重组表达质粒pET28ailve的酶切鉴定 8
2.1.3 重组表达蛋白rSsILVE的聚丙烯凝胶电泳（SDSPAGE）检测 9
2.1.4 重组蛋白rSsILVE多克隆抗体的制备及抗体效价的测定 9
2.2 基因缺失株SS21△ilve的构建 9
2.2.1 ilve上下游同源臂序列及氯霉素抗性基因的PCR扩增与融合 9
2.2.2 重组缺失质粒pSET4s::ilve的酶切鉴定 10
2.2.3 基因缺失株SS21△il *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
ve的鉴定 10
2.3 亲本株及缺失株生物学特性分析 11
2.3.1 形态比较 11
2.3.2 H2O2耐受分析 11
2.3.3 酸耐受分析 11
2.3.4 竞争感染试验 12
2.3.5 致病性试验 13
3 讨论 13
致谢 14
参考文献 15
猪链球菌2型支链氨基酸转氨酶基因缺失株的构建及其致病性分析

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