为了研究单种药物及其复合配方对治疗感染嗜水气单胞菌的黄河鲤的不同影响效果，并观察其在染病及接受治疗中的行为学特点，本文采用浸泡免疫的方法对黄河鲤感染嗜水气单胞菌后的治疗效果开展研究。选用LPS、Poly（IC）、Vc、芽孢杆菌、硝化细菌五种药物，通过正交试验设计拟筛选对感染嗜水气单胞菌的黄河鲤新品系进行浸泡治疗的最佳组合。实验共设置16组，共设置三组对照，在一定细菌浓度的水体中侵染实验组黄河鲤新品系后，分选不同的药物浓度配比对实验组黄河鲤新品系进行浸泡治疗，共设计三组不同药物浓度梯度，分别为LPS+Poly组、芽孢杆菌+硝化细菌组以及抗坏血酸组，实验在这三种药物中共设置12组不同药物浓度配比实验组（F1～F12）。利用分光光度计法拟合曲线测定嗜水气单胞菌菌液浓度，通过预实验对3×105～4×108 cfu/mL四组不同嗜水气单胞菌菌液浓度的半致死浓度的测算，确定造成黄河鲤新品系浸染嗜水气单胞菌的合适菌液浓度为3×105 cfu/mL。研究结果表明各组成活率均在65%以上，不同药物组间感染嗜水气单胞菌的黄河鲤新品系成活率差异显著，其中抗坏血酸组的相对免疫保护率最高，为77.1%。在组内设置不同浓度梯度的药物，结果发现在LPS+Poly组中，F4组的黄河鲤新品系死亡率最低，且显著低于同组的F2、F3和F5组；在芽孢杆菌+硝化杆菌组中，各组差异均不显著；在抗坏血酸组中，F12组的死亡率极显著低于F11、F13和F14。综上认为抗坏血酸对于治疗黄河鲤新品系感染嗜水气单胞菌具有显著疗效，当抗坏血酸的浓度接近1.04～1.56 g/L,硝化杆菌+芽孢杆菌浓度接近0.375～0.383 g/L, LPS+Poly的药物浓度接近2×10-4 g/L时，对治疗由嗜水气单胞菌感染的黄河鲤具有较好的疗效。
目录
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摘要 1
关键词 1
Abstract 2
Key words 2
引言 4
1 材料与方法 6
1.1实验用鱼 6
1.2主要仪器和药品 6
1.3菌种的活化扩增 6
1.4指标测定公式 7
1.5正交实验设计 7
1.6 数据处理 8
2研究结果 8
2 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
.1感染菌种最适浓度的获取 8
2.2攻毒后黄河鲤新品系行为学响应 8
表3 经AH侵染并给药后不同组黄河鲤时间依赖的死亡数计量 9
2.3不同药物配伍对病的治疗效果 9
3讨论 10
3.1攻毒浓度的确定 10
3.2浸染AH的黄河鲤行为学及易感部位分析 10
3.3最佳药物配伍及不同药物间的协同作用 10
致谢 10
参考文献 10
五种不同药物配伍浸泡对黄河鲤新品系感染嗜水气单胞菌的治疗效果研究
引言
引言：嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属弧菌科，气单胞菌属，为兼性厌氧革兰氏阴性短杆菌，属于一种人、畜、水产动物共患病源菌，并广泛分布于天然水体中,其具有的多种致病因子可能导致水产动物出现败血症状[1],该病具有流行范围高、侵染种类多、发病率高等特点，曾经为水产养殖行业带来严重的经济损失。嗜水气单胞菌作为一种高度条件致病菌，常易导致鲤出现细菌性败血症等症状，在生产生活中带来不容小觑的危害。黄河鲤(Cyprinus carpio)隶属于鱼纲、辐鳍亚纲、鲤形目（Cypriniformes）、鲤科(Cyprininae),是我国黄河流域自然形成的重要淡水鱼类。本实验用黄河鲤新品系选自中国水产科学院淡水渔业研究中心从河南省水产科学院引进的第9代豫选黄河鲤[3]为基础，经多代选育后得到的新品系，具有生长速度快、肉质优良等特点[8]。本文采用黄河鲤新品系作为研究对象，一个是评估该品系的抗病力，另一个是研究致病后对其的治愈效果。
嗜水气单胞菌的诱发感染及患病会受到多种外界因素的制约，其中较为显著的有温度[2]、pH、溶氧量等。针对该细菌的高致病率及分布广泛等特点，其致病机理及免疫疫苗的研究受到学界学者的关注。例如：中国水产科学院淡水渔业研究中心的陆春云研究员等[16]，利用具有绿色荧光蛋白基因标记的嗜水气单胞菌对团头鲂进行浸泡攻毒实验，通过对照不同温度情况下攻毒后团头鲂体内AH的组织动态分布，发现最高菌量出现在黄河鲤的鳃部位；与25 ℃相比，在水温32 ℃时团头鲂被嗜水气单胞菌感染的风险更高。在对该病防控方面的研究主要是免疫保护和治疗两种。陈昌福[10]等用酚灭活的柱状噬纤维菌和从该菌体中提取的菌体脂多糖浸泡20～25 g的草鱼鱼种，结果得到酚灭活组的免疫保护率为30%，而脂多糖组的免疫保护率为55%。由于在不同地区同种致病微生物可能存在不同的血清型，因此有必要根据各地致病病原微生物的血清型制备适用于当地的鱼类免疫保护疫苗。华中农业大学的陈昌福[8]等，在大量的致病AH菌株中，挑选了6个毒性较强的菌株，比较分析了不同菌株之间的抗原性差异，出现的凝集效价达到512～2048之间，说明这6个不同菌株中存在大量共同抗原。周勇[12]等通过腹腔免疫注射的方式，用浓度为100倍LD50的AH对免疫组和对照组进行了攻毒实验，得出嗜水气单胞菌疫苗对施氏鲟的相对免疫保护率为76.84%。任燕[13]等为研究蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷(CPMG)在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的佐剂作用，将CPMG和嗜水气单胞菌灭活疫苗联合施用，得出结论为CPMG组的平均相对保护率达到70.6%，复合佐剂组达到88.2%，均显著高于无佐剂组的56.0%。在鲤该病的防治方面，Monwadee W等[16]在黄河鲤全血中发现PAP基因的表达，且当受嗜水气单胞菌感染的黄河鲤在接受PAPphMGFP DNA免疫刺激剂的作用后，其存活率和免疫指数显著增加。
在对嗜水气单胞菌的治疗方面：现在对该病的治疗多集中在利用抗生素和相关药物方面上，但使用抗生素药物具有药物残留性高、用后具耐药性的缺点，促使现在更多的对该致病菌的治疗研究集中在利用中药及其相关提取物来对嗜水气单胞菌进行抑制和治疗上。大学的谭宏亮等发现从中草药大黄、虎杖等提取到的白藜芦醇对嗜水气单胞菌具有明显的抑制作用，腹腔注射25～100 mg/kg的白藜芦醇对感染嗜水气单胞菌的异育银鲫感染嗜水气单胞菌具有一定的治疗作用。李永娟和周文豪[3]向饲料中添加发酵中草药探究对草鱼抗嗜水气单胞菌的影响，发现中草药可提高草鱼抵抗嗜水气单胞菌的能力。Ramasamy H等[]将浓度为108 cfu/ml的嗜水气单胞菌菌液注射到黄河鲤体内，并用1g/L 的印楝叶提取物对注射出血点进行浸泡处理直到病变伤口愈合。对其血液学和生化参数指标进行检测，发现受治疗组的白细胞数量相对于对照组显著增加；红细胞、血红蛋白、血细胞比容呈现先下降而后恢复到正常水平的趋势。
浸泡免疫相对于其他免疫手段来说，具有明显的天然优势：可操作性强，对于较大规模的水体见效快、节约人力等，另外，采用浸泡感染和浸泡免疫的方式会更加接近鱼类在自然环境下感染并免疫该病的过程，对于该种细菌的侵染治疗具有一定的参考价值。因此，本实验采用LPS、Poly（I：C）、Vc、芽孢杆菌、硝化细菌五种药物及其复方组合，并按照不同的剂量水平投放到水体中，以探求不同药物对于宿主感染嗜水气单胞菌后的浸泡治疗效果药物组合的最佳浓度配比。这将对于治疗或缓解感染嗜水气单胞菌的黄河鲤集群的可行性及不同药物配方对于感染嗜水气单胞菌的黄河鲤治疗效果，从而为生产实际中减少该种病害，提高经济效益，降低成本提供一定的参考。
1 材料与方法
1.1实验用鱼

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