黄鳝importinα3基因的克隆与表达分析(附件)【字数：6966】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料2
1.2总RNA的提取及cDNA第一链的合成2
1.3黄鳝importinα3中间保守序列的获得2
1.4 黄鳝importinα3 cDNA末端的克隆3
1.5 序列分析及系统进化树的构建3
1.6成体组织分布及早期发育阶段中的表达水平检测3
2结果4
2.1基因全长cDNA的克隆和编码的蛋白序列分析4
2.2黄鳝importinα3基因的系统进化分析5
2.3 importinα3基因在黄鳝不同成体组织中的表达分析8
2.4importinα3基因在黄鳝胚胎及早期发育阶段中的表达水平8
3.讨论9
致谢10
参考文献10
表1黄鳝早期发育阶段的划分及取样时间2
表2引物3
表3 黄鳝importinα3氨基酸序列与其它脊椎动物的同源性比较5
图1黄鳝importinα3 蛋白结构域的预测结果4
图2黄鳝与其它一些脊椎动物 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072#
importinα3 氨基酸序列的多重比对6
图3 基于不同脊椎动物 importinα3 蛋白氨基酸序列构建的系统进化树(NJ树)7
图4 黄鳝importinα3基因在雌雄个体不同组织中的相对表达分析8
图5黄鳝importinα3基因在早期发育阶段的相对表达水平9
黄鳝importinα3基因的克隆与表达分析
引言
黄鳝(Monopterus albus) 属于硬骨鱼纲、辐鳍亚纲、合鳃目、合鳃科、黄鳝属，俗称鳝鱼,。它广泛分布于中国、美洲和大洋洲等国家和地区，是一种重要的经济鱼类。其营养丰富、肉质鲜美,深受消费者青睐,是我国重要的淡水经济鱼类[1]。黄鳝的生命史伴随着性逆转现象，刚出生到产卵前为雌性，产卵后，卵巢退化，卵巢和精巢组织同时存在性腺中，变为间性，随着性腺发育，卵巢消失，进入雄性阶段，因此我们可以用黄鳝来研究脊椎动物的性别发育和性别决定 [2]。雌性黄鳝在卵子形成过程中需要合成大量的卵黄，细胞内需要有更多蛋白质的供应，此时，就需要转运蛋白帮助细胞质内的一些蛋白质通过核孔复合体运输到细胞核内，进而行使其功能。
真核生物的胞质溶胶中广泛存在着importinα3蛋白，它是α输入蛋白家族中的一员，与核定位信号结合后，将细胞质内的一些蛋白及转录因子等通过核孔复合体运输到细胞核内[3]。研究发现，importin α包含三个保守的结构域, 分别为IBB、ARM和C端结构域。其中IBB结构域位于N端, ARM结构域位于中部，可以与核定位序列（NLS)结合，并包含多个重复ARM单元, 是与货物蛋白结合的部位[4]。importinα3相关功能研究表明，它参与了CTCF转录因子[5]、NFkB转录因子[6]、Daxx蛋白[7]、NS5蛋白[8]等多种蛋白分子的入核递送过程。而外界的一些刺激，比如热应激、氧化应激等都会导致importinα3形成可逆蓄积，影响其核质运输的功能[911]。此外，importinα家族成员通过对底物核质转运的精确调控也参与了细胞分裂、分化、凋亡等生命过程[1214]。
因此，本研究将黄鳝的importinα3 基因作为实验对象，扩增了该基因的c DNA 序列，探究了该基因在雌雄个体组织间的表达情况，并检测其在胚胎及早期发育阶段的表达水平变化，为进一步阐明importinα3基因的遗传特性及相关生理功能提供理论依据，同时也为从基因水平研究黄鳝性别分化提供更多的参考和借鉴。
1材料与方法
1．1材料
黄鳝取自大学无锡渔业学院南泉实验基地。实验前，随机挑选50尾已经性成熟的黄鳝(体重35200g；体长3070cm)暂养于循环水桶里（水温25±0.5℃；pH 7.3），暂养的时间为2周。
实验前将黄鳝取出，解剖进行性腺组织学鉴定，并选取性腺特征比较明显的雌性、雄性黄鳝各5尾。同时取血、性腺、脑、心、肝、脾、肾、小肠、肉、皮肤这10个组织，然后将组织迅速放入液氮中冷冻，并置于80℃条件下保存备用。同时，依照周秋白等[54]对黄鳝早期胚胎及胚后发育阶段的划分，在繁殖过程中，选取黄鳝早期发育的几个时期的样品（表1）用于后续的荧光定量PCR分析。
表1 黄鳝早期发育阶段的划分及取样时间
胚胎发育期
胚后发育期
发育阶段
取样时间
发育阶段
取样时间
卵裂期
囊胚期
原肠胚期
出膜期
4hpf
12.5hpf
30hpf
168hpf
水平游动期
卵黄吸收完成期
1.5dph
8dph
原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/scyz/560813.html
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