为研究杭菊黄烷酮3-羟化酶基因的特性与功能，深入了解杭菊品质形成的基础。本实验运用RT-PCR克隆技术克隆杭菊CmF3H，并对其进行生物信息学分析。并构建杭菊CmF3H基因原核表达载体，将重组质粒pMAL-c2x+CmF3H转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞，在一定条件下进行重组融合蛋白诱导表达。本实验成功克隆了一条编码364个氨基酸，开放阅读框长1 095 bp的CmF3H基因，并且41.15 kDa为其蛋白分子量的预测值约。进化树结果表明，菊科其他植物CmF3H与杭菊同源性高。重组融合蛋白被成功表达，且其分子量与预测值一致。实验结果为进一步研究药用菊花类黄酮合成过程关键酶蛋白的功能及品质形成奠定基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstrac 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1．1．1 实验样品 2
1．1．2 表达载体和表达菌株 2
1．1．3 实验试剂与仪器 2
1．2 实验方法 2
1．2．1总RNA的提取和cDNA的合成 2
1．2．2 CmF3H开放阅读框克隆 2
1．2．3 生物信息学分析 3
1．2．4 构建CmF3H原核表达载体 3
1．2．5 目的蛋白的诱导表达 3
1．2．6 SDSPAGE检测及可溶性蛋白纯化 4
2 结果与分析 4
2．1 杭菊RNA的提取 4
2．2 CmF3H生物信息学分析 4
2．3 CmF3H系统进化树分析 6
2．4 pMALc2x+CmF3H重组质粒的构建及其重组蛋白的氨基酸序列 7
2．5 CmF3H重组融合蛋白SDSPAGE分析 8
2．6 CmF3H重组融合蛋白纯化结果 9
3 讨论 9
致谢 10
参考文献 10
药用菊花CmF3H基因克隆及原核表达

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zyx/561521.html