采食是动物维持生命活动的基本生理过程，采食时间作为一个重要的授时因子，影响机体的生理功能。[目的]本试验旨在探究不同饲喂频率对猪肠道，肝脏，胰腺，肾脏，肌肉，脂肪组织中生物钟基因表达的影响。[方法]试验选取24头杜×长×大三元杂交生长猪（初始体重 15.64±0.69kg），随机分为一次饲喂组（7:00）、三次饲喂组（7:00/12:00/17:00）和五次饲喂组（7:00/9:30/12:00/14:30/17:00）。试验期间所有猪只均可自由饮水并且单栏饲养,每只猪每天饲喂量相同，饲喂量依据（NRC，2012）随生长需要调整。饲喂30天后，屠宰并采集猪的十二指肠、回肠前段、结肠、肝脏、胰腺、肾脏、肌肉和脂肪组织用于提取核酸。[结果]三组猪的外周组织生物钟基因的表达量发生了不同程度的变化。其中，肌肉组织中仅CRY2和PER1基因，回肠组织中仅NPAS2和RORα基因的表达量受到饲喂频率的影响，其余组织均有较多生物钟基因的表达量发生变化。[结论]饲喂量相同的条件下，不同的饲喂频率影响了猪外周组织生物钟基因的表达。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
1引言2
生物节律概述及调控机制 2
1.1.1 生物节律概述2
1.1.2 生物节律分子调控机制2
1.1.3 主要的生物钟基因2
1.2 采食对猪的影响3
1.3 采食与生物节律 3
2 材料与方法3
2.1 试验动物3
2.2 饲喂模式建立3
2.3 组织取样与RNA提取4
2.4 内参基因及引物设计4
2.5 生物钟基因及内参基因qRTPCR分析4
2.6 数据分析4
3 结果与分析4
3.1 饲喂频率对肠道生物钟基因表达的影响4
3.2饲喂频率对肝脏生物钟基因表达的影响6
3.3饲喂频率对胰腺生物钟基因表达的影响7
3.4饲喂频率对肾脏生物钟基因表达的影响7
3.5饲喂频率对肌肉生物钟基因表达的影响8
3.6饲喂频率对脂肪生物钟 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
基因表达的影响9
4 讨论9
4.1 饲喂频率对生物钟基因表达的影响9
4.2 饲喂频率、生物节律与机体代谢之间的关系10
4.3 小结10
致谢10
参考文献11饲喂频率对猪不同组织生物钟基因表达的影响
引言
1 引言
1．1 生物节律概述及其调控机制
1．1．1 生物节律概述
自地球诞生起，在几十亿年的变化中，其地理环境逐渐变得有规律起来，如现在的四季更替、昼夜更替，而生物体为了适应环境，产生相应的有规律的外部活动以及内部的生理活动就称为生物节律。由周期变化的长短生物节律又可以分为近日节律、周节律等，如近日节律呈昼夜24小时循环，也称为昼夜节律（circadian rhythm）。昼夜节律是机体一种自然的内部过程，调节生物机体睡眠/觉醒，周期大约24小时。目前研究认为，控制生物节律的中枢位于视交叉上核（suprachiasmatic nucleus or nuclei，SCN）。视交叉上核位于下丘脑中的一个小区域，是生物钟基因母钟的主要表达区域，而生物钟基因不仅在中枢系统SCN中表达，控制生物种基因的表达还存在着子钟。有研究表明，在动物的皮肤毛囊上[1]、乳腺中[2]、胃肠道的肠肌表面[3]以及内脏器官等[4]外周组织中的生物钟基因子钟均有表达。
1．1．2 生物节律分子调控机制
生物钟调控机制是一种基于转录翻译的负反馈调节机制，包括转录调控激活调节因子蛋白（BMAL1蛋白和CLOCK蛋白）和转录抑制调控因子蛋白PER蛋白（PER1、PER2、PER3），CRY蛋白（Cry1、Cry2）[5]。研究表明，这种调控反馈回路是由两部分组成，第一部分是由ARNTL基因也就是BMAL1基因和CLOCK基因编码的蛋白通过一种结构域形成异二聚体，它会与PER和CRY基因启动子区的Ebox（CACGTG）结合，从而使这些基因开始转录，转录翻译得到的PER和CRY蛋白在酪蛋白激酶（CKI）的磷酸化形成的产物会抑制异源二聚体的转录；第二部分是异二聚体激活视黄酸相关受体基因从而激活PPAR α的转录，而与此同时PPAR α也会与相关基因启动子区的PPRE结合，诱导其发生转录[57]。
1．1．3 主要的生物钟基因
1.1.3.1 CLOCK 基因
由CLOCK（circadian locomotor output cycles kaput）基因编码的蛋白质在调节昼夜节律中起重要作用，在各个组织中均有广泛的表达。这种蛋白质编码bHLH家族的转录因子，含有DNA结合组蛋白乙酰转移酶活性。编码的蛋白质与ARNTL（BMAL1）形成异二聚体，结合Period（PER1，PER2，PER3）上游的Ebox增强子元件和Cryptochrome（CRY1，CRY2）基因并激活这些基因的转录。PER和CRY蛋白通过与CLOCK / ARNTL复合物的反馈环相互作用并抑制它们自身的转录。
1.1.3.2 CRY1基因
该基因编码黄蛋白腺嘌呤核苷酸结合蛋白，它是调节生物钟的生物膜核心振荡器复合物的关键组成部分。该基因由 CLOCK/ARNTL 杂二聚体进行了放大, 但随后利用 PERSNY杂二体与 CLOCK/ARNTL 相互作用, 在反馈回路中抑制了这种作用。这个基因中的多态性与睡眠模式的改变有关。在完全黑暗中，小鼠CRY1基因的丢失会导致其生理周期缩短。该基因在睾丸 (RPKM 23.5)、甲状腺 (RPKM 10.6) 和25个其他组织中均有广泛表达。
1.1.3.3 ARNTL基因
ARNTL也被称为BMAL1，该基因编码的蛋白会与CLOCK编码的蛋白形成异二聚体，该异二聚体会结合Period（PER1，PER2，PER3）和Cryptochrome（CRY1，CRY2）基因上游的Ebox增强子元件并激活这些基因的转录。PER和CRY蛋白通过与CLOCK / ARNTL复合物的反馈环相互作用而异二聚化并抑制它们自身的转录。该基因的缺失或抑制会影响脂肪生成。

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