为了研究日粮纤维水平对二花脸猪肠道通透性和结肠细胞增殖与凋亡基因表达的影响，选择体重相近（38.3±0.9 kg）、健康的二花脸猪15头，随机分为3个处理组，每组5个重复，因使用奥饲本全自动生产性能测定系统进行饲喂，每个重复1头猪。试验预试期10 d，所有猪饲喂基础日粮；正试期28 d，3个处理组分别饲喂基础日粮、7%麸皮替代基础日粮、14%麸皮替代基础日粮。试验结束，采集血液样品用于肠道通透性相关指标内毒素、二胺氧化酶和D-乳酸含量测定；采集结肠黏膜样品用于测定结肠的促凋亡基因Caspase3和抗凋亡基因Bcl-2L1的基因表达量。结果显示，日粮麸皮替代水平对D-乳酸含量和Bcl-2L1的mRNA表达量有显著影响（P＜0.05）。与对照组相比，7%和14%麸皮替代组的D-乳酸含量显著升高（P＜0.05），14%麸皮替代组结肠的Bcl-2L1 mRNA表达量显著升高（P＜0.05）。综上所述，7%麸皮替代水平增大二花脸猪肠道通透性，14%麸皮替代日粮水平可抑制二花脸猪结肠细胞的凋亡。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1材料与方法4
1.1试验动物 4
1.2试验设计与饲养管理4
1.3试验日粮4
1.4样品采集4
1.5指标测定与方法5
1.5.1肠道通透性血清学检测5
1.5.2结肠细胞增殖、凋亡基因表达量测定5
1.6数据统计与分析6
2结果6
2.1日粮纤维水平对二花脸猪肠道通透性血清指标的影响6
2.2日粮纤维水平对二花脸猪结肠细胞增殖与凋亡基因表达量的影响7
3讨论7
3.1日粮纤维水平对二花脸猪肠道通透性血清指标的影响7
3.2日粮纤维水平对二花脸猪结肠细胞增殖与凋亡基因表达量的影响7
4结论8
致谢8
参考文献8
图1血清内毒素标准曲线6
图2 血清DAO标准曲线6
图3 血清D乳酸标准曲线6
表1日粮配方及营养水平4
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表2结肠细胞凋亡与增殖基因引物序列信息5
表3日粮纤维水平对二花脸猪肠道通透性血液指标的影响6
表4日粮纤维水平对二花脸猪结肠细胞增殖与凋亡基因表达量的影响 7
日粮纤维水平对二花脸猪肠道通透性和结肠细胞增殖与凋亡基因表达的影响
引言
我国年生猪存栏量、出栏量以及猪肉产量均居世界首位，是著名的养猪大国和猪肉消费大国。在养猪成本中，玉米、豆粕等主要饲料原料占了很大比重。近年来，饲料资源逐渐匮乏，随着玉米、大豆等主要粮食作物进口量的不断增加，寻求玉米、大豆替代品从而降低养殖成本迫在眉睫[1]。
麸皮是小麦加工面粉后的副产物，由小部分胚乳、种皮、胚等组成，价格相对低廉，产量丰富，常被用于猪饲料的添加来降低成本，其日粮纤维含量较高[2]。尹佳[3]的研究发现日粮中添加的粗纤维水平较高会导致日粮中能量被纤维所稀释，从而降低料重比，对猪的生长产生一定抑制作用。王怡丹等[4]的研究也表明饲喂高纤维日粮后DLY生长育肥猪生产性能受到影响，平均日增重、日采食量以及料重比显著降低。许多研究也发现在猪日粮中添加粗纤维会引起日粮中其他营养成分的表观消化率降低。Wilfart等[5]在生长猪中分别添加了0%、20%、40%的麸皮，结果显示，添加麸皮虽不影响养分的回肠消化率，但随着添加量的提高，粪中粗蛋白、粗脂肪和能量的表观消化率有所降低。究其原因一方面是日粮纤维其特有的持水性、黏性等理化性质通过改变肠道食糜的黏度和通过肠道速度以及吸附营养物质等，从而降低养分吸收的效率。另一方面，高纤维日粮也可能会对动物肠道黏膜造成损伤使得日粮养分消化率受到影响。因此麸皮在猪饲养中的应用具有一定局限性。
日粮纤维是指植物细胞壁中不能被小肠利用，但能够被后肠微生物部分或全部酵解的一类混合物，包括果胶、纤维素、半纤维素、木质素及非淀粉多糖（NonStarch Polysaccharides, NSP）等植物性组分[6]。已有大量研究表明，日粮纤维在调节动物肠道菌群结构、维持肠道黏膜屏障功能以及促进肠道健康等诸多方面具有重要作用[79]，同时能够显著影响肠道微生物菌群数量及丰度[1012]。肠道内黏液层与肠上皮细胞紧密结合构成了将细菌和肠道上皮分隔开来的肠道粘膜屏障，是阻止各种病原微生物与毒素从肠道进入机体的重要屏障结构[13]。黏液层的变化直接关系到肠黏膜屏障的完整性以及肠道通透性，维持肠粘膜屏障完整对防御病原菌入侵十分必要，一旦其出现损伤则会增加肠黏膜通透性，进而有损猪的机体健康。
肠道黏液层正常情况下受杯状细胞合成与分泌黏蛋白的调控，维持在动态平衡状态中[14]。日粮纤维可通过促进杯状细胞的增殖和黏蛋白分泌，进而增强肠道黏膜屏障的功能。根据吴维达等[15]的研究，饲喂菊粉和微晶纤维后生长猪结肠上皮杯状细胞的数量均显著高于对照组。Zhou等[16]研究发现高抗性淀粉能够明显提高结肠黏蛋白水平。Vila[17]研究表明，与对照组相比，玉米纤维日粮组和小麦麸纤维日粮组猪回肠和结肠中黏蛋白水平均显著增加。肠三叶因子是由杯状细胞分泌的小分子多肽，它能与黏液中的糖蛋白结合形成稳定的凝胶复合物，增强黏液层的防御屏障功能，减少有害物质或机械力等外源因素对肠道黏膜的损伤。Chen等[18]的试验表明，与对照组相比，饲喂小麦麸纤维可显著增加断奶仔猪回肠杯状细胞数量和结肠三叶因子水平。
肠道上皮细胞包括吸收细胞、杯状细胞、内分泌细胞、未分化细胞、潘氏细胞等，是肠道黏膜屏障的重要组成部分。正常情况下，肠道上皮细胞不断更新，维持着增殖与凋亡的动态平衡，这种稳定状态有利于机体的肠道健康。排列紧密的黏膜上皮细胞间连接方式多种多样，其中通过蛋白质之间相互作用形成的紧密连接，能够在调节肠上皮细胞的选择通透性、调控细胞增殖中起重要作用[19]。研究表明，小麦纤维饲粮和豌豆纤维饲粮都可显著提高生长猪回肠和结肠上皮细胞紧密连接蛋白的mRNA表达量[15]。张莉[20]也发现日粮纤维能够提高机体抵抗病原菌肠道感染的能力，并促进肠道上皮细胞的增殖，提高机体免疫力，对维持肠道内环境稳态以及肠道屏障的完整性具有积极作用。因此，研究日粮纤维添加量对肠道健康的影响以及麸皮的合理应用具有重要意义。

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