目录
摘要Ⅱ
关键词Ⅱ
AbstractⅢ
引言
引言1
1材料与方法1
1.1材料 1
1.1.1 T. spiralis虫体和实验动物1
1.1.2质粒与菌种2
1.1.3主要仪器和试剂2
1.2方法 2
1.2.1引物设计与合成2
1.2.2旋毛虫总RNA的提取及cDNA的合成2
1.2.3孕酮受体基因克隆3
1.2.4基因序列分析方法4
1.2.5重组表达质粒的构建4
1.2.6重组蛋白的表达4
1.2.7重组蛋白的纯化4
2 结果与分析5
2.1 rTsMAPRC2基因的克隆5
2.2 rTsMAPRC2基因的序列分析 5
2.3 rTsMAPRC2基因的原核表达 7
3讨论9
致谢9
参考文献9
旋毛虫孕酮受体基因的克隆与表达
摘 要
根据旋毛形线虫膜结合孕酮受体2基因（rTsMAPRC2，下文简称旋毛虫孕酮受体）设计特异性引物，通过RTPCR反应从肌幼虫总RNA中扩增出孕酮受体基因片段。将该基因片段克隆到pMD18T 载体，对其序列进行测定和分析。将该基因亚克隆到原核表达载体pET32a并转化到大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后用SDSPAGE分析目的蛋白的表达情况，并对重组蛋白进行纯化。结果显示，RTPCR产物大小480bp左右，与预期一致。SDSPAGE电泳结果表明，融合蛋白的相对分子量约为38kDa，且在IPTG诱导34 h后表达量最高，纯化后显示单一蛋白条带。
Cloning and Expression of Membrane Assosiated Progesterone Receptor from Trichinella spiralis
ABSTRACT
A pair of specific primers were designed based on the gene sequence  *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
of Trichinella spiralis membraneassociated progesterone receptor component 2 (rTsMAPRC2). TsMAPRC2 gene fragment was amplified by RTPCR, using total mRNA from the muscle larvae as the template. The RTPCR product was detected by agarose gel electrophoresis, purified and ligated with pMD18T vector, then the recombinant vector was sequenced and analyzed. To express TsMAPRC2, The prokaryotic expression vector pET32aTsMAPRC2c was constructed and transformed into E. coli BL21. After inducting by IPTG, the expression of the target protein was analyzed by SDSPAGE. The results show that the size of the RTPCR product is about 480 bp, which is consistent with expectations. SDSPAGE showed that TsMAPRC2 was expressed as a fusion protein sized as 36kDa, and the expression level reached the top after 3 to 4 hours induction by IPTG.
引言
旋毛虫是旋毛形线虫（Trichinella spiralis）的简称，是引发全球性分布食源性人兽共患寄生虫，目前已发现有9个种和3个分类地位尚未明确的基因型[1]。动物通过摄取含有旋毛虫肌幼虫的肉类而感染，常见症状为全身发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、肌肉痛、甚至心肌炎和脑炎[2]。旋毛虫最早在1835年由Owen首次在伦敦发现，是最早被发现的种，是到目前为止牲畜和人类的主要感染源[3]。旋毛虫分布广泛、宿主众多，防控十分困难，甚至在最寒冷的北极地区也有分布[4]，被列入世界屠宰动物首检和强制必检寄生虫名录[5,6]。即使假设旋毛虫在屠宰动物中全部净化，由于自然界野生动物携带率较高[7]，旋毛虫病的爆发风险仍然存在。
AGUILARDíAZ 等[8]在对猪带绦虫和囊尾蚴的研究中发现一种新的孕酮受体膜成分（progesterone receptor membrane component，PGRMC），该蛋白位于囊尾蚴的皮下组织，对该蛋白进行计算机分子模拟发现PGRMC具有潜在的结合甾体激素的能力。孕酮可以通过PGRMC结合直接作用于囊尾蚴。ESCOBEDO 等[9] 检测猪带绦虫的孕酮受体相关序列发现，该序列与鱼类和两栖动物的孕酮受体高度相关，而与鸟类和哺乳动物的亲缘性较差。但在犬弓形虫中却发现孕酮受体基因与犬的相关基因片段相似[10]。此外研究还发现孕酮能促进猪带绦虫囊尾蚴头节外翻和虫体生长，而孕酮的拮抗剂RU486能永久性阻断囊尾蚴头节的外翻，提示RU486具有成为一种新的抗猪带绦虫药的潜能[9]。

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