目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法 3
1.1 抗体和试剂 3
1.1.1 抗体 3
1.1.2 试剂 3
1.2 主要仪器设备 4
1.3 抗体和试剂的配制 4
1.3.1 抗体的稀释 4
1.3.2 试剂的配制 4
1.4 小鼠卵母细胞采集和体外培养 4
1.5 RNA的提取及RTPCR 5
1.6 免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察 5
1.6.1 免疫荧光染色具体步骤 5
1.6.2 激光共聚焦显微镜观察 6
1.7 免疫蛋白印迹法（Western Blot) 6
1.8 显微注射CXCR3的干扰RNA 7
1.8.1 设计合成CXCR3小干扰RNA(siRNA)靶序列 7
1.8.2 制备固定针和注射针 7
1.8.3 显微注射 7
1.9 数据分析 7
2 结果与分析 8
2.1 CXCR3在小鼠卵母细胞中的表达和定位 8
2.1.1 各组织CXCR3 mRNA相对表达量比较 8
2.1.2 CXCR3在卵母细胞中的定位和表达 8
2.2 CXCR3抑制剂能解除IBMX对卵母细胞减数分裂的抑制作用 9
2.3 CXCR3的表达被干扰后极体排出异常 10
2.3.1 检测CXCR3敲低效率 10
2.3.2 CXCR3敲低对卵母细胞成熟的影响 11
3 讨论 12
致谢13
参考文献14
附录A16 小鼠卵母细胞中CXCR3基因的表达与功能初探
摘要
CXCR3又称GPCR9（G蛋白偶联受体9）和CD183，是趋化因子CXC亚族的受体。CXCR3已被证明与肿瘤、自身免疫疾病、肝脏特异性疾病等相关，然而课题组前期研究发现，CXCR3基因敲除母鼠产仔数下降，提示该基因可 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
能与母鼠的繁殖性能相关。本文首先采用RTPCR技术比较了小鼠各组织器官CXCR3基因mRNA丰度的差异，发现脾脏、胰脏与卵巢等器官中CXCR3具有较高的表达量。对卵巢的进一步研究发现，CXCR3在卵母细胞中高表达，且定位在卵母细胞皮质层下，与皮质下的Actin共定位。在卵母细胞体外成熟培养液中添加CXCR3特异性抑制剂能够部分解除IBMX对卵母细胞成熟的抑制作用，卵母细胞GVBD发生率显著升高。进一步地，采用RNAi敲低卵母细胞中CXCR3表达量后，卵母细胞的成熟受到抑制，第一极体排出率显著下降，且出现均等分裂的表型。论文研究结果表明，卵母细胞中存在CXCR3表达，并且可能通过影响与其共定位的Actin调控卵母细胞的成熟。

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