[目的]本课题利用聚合酶链式反应（PCR）和一代测序技术，旨在通过SAS 9.4软件分析UCHL1基因g.32353260和g.32353299位点多态性与二花脸猪产仔数的关联性，以期判定g.32353260和g.32353299位点能否作为二花脸猪产仔数分子选育的标记。[方法]本试验以334头二花脸猪为试验动物，记录其产仔数和产活仔数，开展UCHL1基因g.32353260和g.32353299位点多态性检测及其与二花脸猪产仔数的关联性分析。[结果]根据基因的分型结果可知，g.32353260位点为G/C突变，CG基因型全部胎次母猪产活仔数显著高于GG基因型（P < 0.05），与二花脸猪的产仔数显著关联，显示出杂种优势。g.32353299位点为A/G突变，AA、AG、GG三种基因型产仔数差异均不显著，与二花脸猪的产仔数没有显著关联。[结论]本试验未能证明g.32353299位点能显著影响二花脸猪的产仔数。g.32353260位点虽能显著影响二花脸猪的产仔数，但其位点多态性在二花脸猪中表现为杂种优势（CG型的平均产仔数最高），因此该位点尚不适合用于二花脸猪产仔数的分子育种。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法3
1.1 试验材料 3
1.2 试验方法 3
1.2.1 样品DNA的提取与稀释3
1.2.2 利用Primer Premier 5软件设计目标位点的引物4
1.2.3 琼脂糖凝胶试剂的制备4
1.2.4 确定最适退火温度4
1.2.5 目的片段PCR扩增与检测 4
1.2.6 目的片段DNA测序4
1.2.7 基因位点分型4
1.2.8 位点基因型与产仔数的关联性分析4
2 结果与分析5
2.1 UCHL1基因位点g.32353260分型结果5
2.2 UCHL1基因g.32353260位点多态性与二花脸猪产仔数的关联性分析5
2.3 UCHL1基因位点g.32353299分型结果6
2.4 UCHL1 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
基因g.32353299位点多态性与二花脸猪产仔数的关联性分析6
3 讨论7
3.1 关于UCHL1基因g.32353260和g.32353299位点不能作为二花脸猪产仔数分子选育标记的探讨8
3.2 扩大群体进一步验证该位点的可靠性 8
3.3 进一步在UCHL1基因上筛选影响高产仔性状的位点8
4 总结8
致谢8
参考文献9
UCHL1基因g.32353260和g.32353299位点多态性与二花脸猪产仔数的关联性分析
引言
二花脸猪是太湖流域的地方猪种，主要分布在江苏省江阴、武进、常熟等市、县。二花脸猪是繁殖性能杂种优势的典型代表，其品种产生可追溯到常州武进区的焦溪与江阴市申港一带的一种皮较宽厚、个体较大的华中型猪种大花脸猪和由华北型的小型淮猪演变而来的米猪杂交后产生的小花脸猪，小花脸母猪再与大花脸公猪回交，经长期选育，最终形成现今的二花脸猪品种[1]。二花脸猪因其突出优异的高产仔数性状，使其成为极为宝贵的种质资源；记录在案的最高窝产仔数达到惊人的42头，其平均窝产仔数也达到15.69头[2]。哺乳期间发情、妊娠是二花脸猪种质资源的又一宝贵特性，既可缩短产仔间隔，提高年繁殖频率，又使培育仔猪时能够乳料并用，没有必要使用昂贵的仔猪补料，可节约培育仔猪的饲料成本[1]。二花脸猪具有性成熟早、乳头数多、繁殖寿命长的繁殖特性，其性情温驯、耐粗饲、肉质优异。二花脸猪的优秀杂交利用效果，使其成为极佳的专门化母系，为国内高产、优质、高效的猪配套系提供了重大贡献。然而近年来由于国内大量饲喂瘦肉型猪种，包括二花脸猪在内的地方猪种饲养量不断减少，处于保种状态，其产仔性能也存在一定水平下降，亟需在保种的同时，建立高产仔性能的专门化品系。
产仔数作为母猪重要的生产性状之一，反映了母猪繁殖力水平、猪场生产水平和经济效应。然而产仔数是受多基因调控的低遗传力复杂的数量性状[3]，传统选育方法基于表型选择，育种进展缓慢。近年来利用分子标记辅助选育（MAS）技术和全基因组选择育种（GS）技术能极大提高选择的准确性[3]，并且大大缩短选育世代，提高育种效率，对提高包括二花脸猪在内的种猪产仔数有着重要意义。
母猪的高产仔数性状主要与本身的高产基因相关，因此鉴别高产基因就成为分子标记辅助育种的关键。随着分子育种技术的进步，出现多种鉴定基因位点的方法，其中候选基因法与定位数量性状基因位点(QTL)法成效显著，发现多种可能影响产仔数的QTL。如Rohrer等[4]在梅山猪与大约克夏猪的杂交子代中鉴别到影响总产仔数的QTL位于猪3、8、9、10和15号染色体上。Wilkie等[5]发现影响窝产仔数的QTL位于猪6和15号染色体上。
在QTL区间内能够鉴定到多个影响母猪产仔数性状的候选基因。如骨桥蛋白（OPN）基因，位于猪8号染色体上，参与调节胚胎的生长发育，启动和维持妊娠，在介导细胞基质间的互作及细胞信号转导过程中发挥重要的作用[6]。Liaw等[7]使用微卫星标记和PCR技术研究了34头大白猪OPN基因型对新生仔猪存活率的影响, 发现OPN对母猪的4～7胎产仔数影响显著；李不学等[8]研究OPN基因多态性与大白猪产仔数的关系时发现，OPN基因A等位基因的频率是0.1851，B等位基因的频率是 0.8149；不同基因型经产母猪和所有胎次母猪的总产仔数、产仔活数呈AA＞AB＞BB趋势，且AA型显著高于AB和BB型，说明OPN可以考虑作为提高猪产仔数的遗传标记。Ikemoto T等[9]认为促性腺激素释放激素（GnRH）和它的特定受体(GnRHR )的交互作用在生殖功能规则中扮演一个关键性的角色，垂体促性腺对GnRH的反应与细胞表面的GnRHR浓度直接相关，共同调节繁殖机能；丁朝阳等[10]检测到GnRHR基因A310C位点的多态性，数据统计分析表明该位点与长白猪的产仔数显著相关。双调蛋白（AREG）是表皮生长因子之一，参与调控颗粒细胞的黄素化、卵母细胞减数分裂的恢复及调控卵子成熟、卵丘复合体的扩张及排卵, 而且其表达水平与卵子的发育潜能密切相关[11]。赵西彪[12]以116头小梅山和144头大约克猪为研究对象，研究AREG基因中StyI酶切位点与产仔数性状的相关性，结果表明基因型为AB型的母猪比AA型的在产仔性能方面均有显著优势。李文婷等[13]通过荧光素酶法比较120头太湖流域地方猪种（梅山猪、二花脸猪）和122头杜洛克猪与ESR1的结合效率，梅山猪和二花脸猪产生了明显较高的荧光素酶活性，这表明太湖流域猪种可能更有效地结合ESR1，并提高骨形态发生蛋白受体1B（BMPR1B）的表达，促进妊娠期子宫发育，从而有助于提高猪的繁殖力。

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