目录
摘要Ⅲ
关键词Ⅲ
AbstractⅣ
引言
选题背景Ⅴ
1 文献综述1
1.1 SMAD蛋白家族简介及分类1
1.2 SMAD蛋白家族在生殖中的研究进展1
1.2.1 SMAD蛋白家族在生殖系统发育中的作用1
1.2.2 SMAD蛋白家族对生殖激素的调节作用1
1.2.3 SMAD2在生殖系统中的功能2
1.3 展望3
2 方案论证4
2.1 设计原理4
2.2 方案分析4
3 材料与方法 5
3.1 试验动物5
3.2 主要仪器与试剂5
3.2.1 主要仪器5
3.2.2 主要试剂5
3.3 主要溶液配制5
3.4 试验方法5
3.4.1 样品处理6
3.4.2 RNA提取与逆转录 6
3.4.3 实时荧光定量PCR检测 7
3.4.4 免疫组化 9
3.4.5 Westernblot 10
3.4.6 SMAD2的siRNA序列设计与合成10
3.4.7 睾丸LCs培养与转染11
3.4.8 （细胞）RNA提取与逆转录11
3.4.9 （细胞）实时荧光定量PCR检测11
3.4.10 （细胞）Westernblot11
3.4.11 睾酮激素检测12
3.5 数据统计与分析 12
4 结果与分析 13
4.1 SMAD基因家族在睾丸发育中的研究 13
4.2 SMAD2、4、7的组织特异性研究13
4.3 SMAD2在睾丸发育中的研究 14
4.4 SMAD2在睾丸组织中的表达定位14
4.5 SMAD2在睾丸间质细胞中的功能研究15
4.5.1 SMAD2干扰效果检测15
4.5.2 干扰SMAD2对睾酮激素水平的影响16
5 讨论与结论 17 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072# 

5.1 SMAD2、SMAD4、SMAD7在睾丸发育过程中可能有协同作用17
5.2 SMAD2参与湖羊睾丸发育调控17
5.3 SMAD2参与睾酮激素的合成与分泌 18
5.4 小结18
致谢20
参考文献21SMAD2及其基因家族在湖羊睾丸发育过程中的表达研究
摘 要
湖羊是我国著名的珍贵畜牧资源之一，以湖羊为模式动物研究反刍动物繁殖机理，对动物育种工作的实践应用具有重要的指导意义。已有研究表明，SMAD2蛋白可通过协调TGFβ信号通路调节垂体生殖激素LH、FSH的合成，以此影响湖羊的繁殖性能。此外，SMAD2表达异常可能会导致性腺细胞功能紊乱，进而导致生殖激素分泌异常、胚胎性别决定异常甚至生殖疾病。但是关于SMAD2在雄性湖羊生殖中的功能研究还鲜有涉及。本试验拟利用性成熟前后不同发育阶段（3M，6M，9M，2Y）的雄性湖羊12只，每组3只，取其睾丸组织进行体内外试验研究SMAD2及其家族在雄性湖羊睾丸中的表达模式。试验方法涉及免疫组化、实时荧光定量PCR、Westernblot、ELISA酶联免疫吸附等技术。试验结果显示，随着年龄增长SMAD2、4、7在睾丸组织中的表达逐步降低，而SMAD2蛋白的表达主要定位于精原细胞、支持细胞和间质细胞，SMAD2受到干扰时睾酮激素的产生受到明显限制。本研究为维持湖羊生殖健康、高效繁殖提供理论基础，并为反刍动物高繁新品种选育提供新思路。
ABSTRACT
Hu sheep is one of the famous precious animal husbandry resources in China. Taking Hu sheep as a model animal to study the reproductive mechanisms of ruminants shows important guiding significance for the practical application of animal breeding. Our previous research suggested that SMAD2 regulates the synthesis of pituitary reproductive hormones like LH and FSH by coordinating the TGFβ signaling pathway and affects the reproductive performance of Hu sheep. Abnormal SMAD2 expression may result in gonad cell dysfunction, which may lead to abnormal secretion of reproductive hormones, embryonic sex determination abnormalities and even reproductive diseases. However, its research in the reproductive system of male Hu sheep has not been well studied. This study will be carried out using 12 male Hu sheeps at different developmental stages (3M, 6M, 9M, 2Y) before and after sexual maturity (3 samples per group) and take their testes for in vitro and in vivo studies. The methods used by this research include immunohistochemistry, qRTPCR, Westernblot, ELISA and other techniques. This study aims to reveal the expression pattern of SMAD2 and its family in male Hu sheep testis. Our results show that the expression of SMAD2, 4, 7 in testicular tissue gradually decreases with age growing, and the expression of SMAD2 is mainly located in spermatogonia, sertoli cells, and leydig cells. When SMAD2 is interfered, the production of testosterone hormone is obviously limited. The knowledge generated from this study will lay a theoretical foundation for maintaining the reproductive health and highefficient reproduction of Hu sheep and provide new insights to select new highbreeding ruminant breed.

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