目录
摘要Ⅲ
关键词Ⅲ
ABSTRACTⅣ
KEY WORDSⅣ
选题背景Ⅴ
1 文献综述1
1.1垂体功能与哺乳动物生殖1
1.2 长链非编码RNA在垂体中的研究进展1
1.2.1 LncRNA在哺乳动物生殖中的研究1
1.2.2 LncRNA在垂体中的研究2
1.3 HSD17B12的功能研究进展2
1.4 展望2
2 方案论证4
3 材料与方法5
3.1 前期试验设计5
3.2 主要试剂和仪器设备5
3.2.1 主要试剂5
3.2.2 主要仪器5
3.3 样品采集5
3.4 生物信息学分析5
3.5 石蜡切片5
3.6 免疫组化6
3.7 各组织总RNA的提取和反转录6
3.7.1 各组织总RNA的提取6
3.7.2 RNA浓度测定6
3.7.3 RNA反转录6
3.8 引物设计和引物验证7
3.8.1 引物设计7
3.8.2 引物验证7
3.9 实时荧光定量PCR8
3.10 垂体细胞的分离和鉴定8
3.10.1 垂体细胞的分离8
3.10.2 免疫荧光9
3.11 垂体细胞的培养和转染9
3.12 细胞总RNA的提取和反转录9
3.12.1 细胞总RNA的提取9
3.12.2 细胞RNA的反转录9
3.13荧光定量PCR（细胞）9
3.14 数据统计与分析 9
4 结果与分析10
4.1预测靶基因HSD17B12的CDS区扩增及蛋白同源性比对10
4.2 HSD17B12在垂体中的表达定位11
4.3 LncRNA TCONS_00066406及其预测靶基因HSD17B12的生物信息学分析12
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06及其预测靶基因HSD17B12的组织特异性研究13
4.5 湖羊垂体细胞的分离鉴定13
4.6 干扰LncRNA TCONS_00066406对靶基因及垂体激素合成相关基因的影响14
5 讨论和结论15
致谢17
参考文献18
LncRNA TCONS_00066406及其预测靶基因HSD17B12在绵羊垂体中的表达研究
摘 要
长链非编码RNA（Long noncoding RNA, LncRNA）作为非编码RNA家族的重要成员，能够调节哺乳动物生殖系统的分化发育与生理功能，还可调节下丘脑和垂体的生长发育，进而影响整个下丘脑垂体性腺轴。HSD17B12作为17β羟基类固醇脱氢酶（17βHSD）中的一员，参与调节类固醇的产生，在类固醇激素合成通路上富集，并与性激素的生成相关。根据前期测序结果，实验室筛选出了包括lncRNA TCONS_00066406在内的5个差异表达的候选lncRNAs，且测得HSD17B12为lncRNA TCONS_00066406的预测靶基因。本试验选取性成熟前和性成熟后（3月龄和9月龄）的雄性湖羊各3只作为实验动物，取垂体等各组织，依次进行了该lncRNA和预测靶基因的生物信息学分析，组织特异性检测以及相关体外干扰试验等。结果显示，该lncRNA和HSD17B12间存在反义作用关系，且均在垂体特异性高表达，该lncRNA被干扰后HSD17B12及垂体激素分泌相关基因的表达水平均显著降低（P<0.05）。揭示了lncRNA TCONS_00066406与HSD17B12之间的靶向调控关系，证明测序结果的可靠性，并进一步推断了该lncRNA和HSD17B12在垂体细胞的功能。为研究湖羊垂体中lncRNA参与的调控机制提供一定的基础。

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