猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌。胞外丝氨酸蛋白酶（ESP）在细菌的感染过程中发挥重要作用。为了研究ESP对SS2强毒株毒力的影响，构建了ESP的基因缺失株。利用温敏自杀载体pSET4s通过同源重组的方法将氯霉素基因（CatR）替换目的基因ESP，获得缺失株SS2-1△esp；通过 BALB/c 小鼠评价ESP基因缺失前后细菌毒力的变化，与亲本株SS2-1相比，ESP基因缺失株SS2-1△esp对BALB/c小鼠的致死率没有明显的降低；竞争性试验表明缺失株SS2-1△esp较亲本株SS2-1在脑组织中的定植能力减弱。表明ESP影响猪SS2的毒力，可能是一种新的毒力相关因子。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract. 3
Key words 3
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.1.1 质粒、菌株和实验动物 4
1.1.2 引物 4
1.1.3 主要试剂 5
1.1.4 培养基 5
1.1.5 仪器 5
1.2 方法 5
1.2.1 基因片段的扩增与纯化 5
1.2.1.1 SS21基因组DNA的提取 5
1.2.1.2 ESP基因上下游同源臂序列及氯霉素抗性基因的扩增 5
1.2.1.3 PCR扩增产物的纯化 6
1.2.2 重组质粒的构建 6
1.2.2.1 PCR扩增产物融合 6
1.2.2.2 融合PCR片段与载体连接并转化 6
1.2.2.3 重组质粒的鉴定 6
1.2.3猪链球菌2型ESP基因缺失株的构建 7
1.2.3.1 SS21感受态细胞的制备 7
1.2.3.2 重组质粒电转化 7
1.2.3.3 基因缺失株的筛选与鉴定 7
1.2.4 小鼠致病性试验 8
1.2.5 亲本株与缺失株的竞争性感染实验 8
2 结果 8
2.1 目的基因片段的扩增与融合 8< *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
br /> 2.2 重组质粒pSET4S::ESP的鉴定 9
2.3 基因缺失株SS21△esp的鉴定 9
2.4 BALB/c小鼠致病试验 10
2.5 竞争性感染试验 11
3.讨论 11
致谢 12
参考文献 13
猪链球菌2型ESP基因缺失株的构建及其致病性分析

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