山羊疱疹病毒Ⅰ型（Caprine herpesvirus 1，CpHV-1）是疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科水痘病毒属的双链DNA病毒，可引起羔羊出现致命全身性感染以及成年山羊亚临床生殖系统感染。本研究是通过建立包被gB蛋白的间接ELISA抗体检测方法来对该病进行检测。扩增gB基因主要抗原表位，连接到pET-28a（+）载体上，构建pET-28a-gB-1重组质粒，转化至Arctic Express表达菌中，使用IPTG诱导表达，建立间接ELISA抗体检测方法并对条件进行优化。本研究成功构建pET-28a-gB-1质粒，诱导表达的gB-1蛋白经SDS-PAGE与Western blot鉴定，证明该蛋白正确表达且抗原性与特异性较好。利用纯化后的蛋白作为包被抗原并优化反应条件，确定该间接ELISA最佳包被浓度为2.5μg/mL、血清稀释度为1100、血清作用时间为1.5h、酶标二抗浓度为14000、二抗所需的反应时间为30min、底物显色所需的时间为7min。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
1 引言1
1.1 病毒的形态结构1
1.2 病毒的致病机制与临床症状2
1.3 病毒的流行病学2
1.4 病毒的主要糖蛋白及其功能2
1.5 目的与意义2
2 材料与方法3
2.1 材料3
2.2 引物的设计与合成3
2.3 病毒DNA提取与扩增3
2.3.1 病毒DNA提取3
2.3.2 摸索PCR最佳退火温度（Tm）3
2.3.3 病毒DNA扩增3
2.4 目的片段的克隆3
2.5 表达载体的构建与鉴定4
2.6 重组gB1蛋白的表达、鉴定及纯化4
2.6.1 pET28agB1载体转化至大肠杆菌Arctic Express4
2.6.2 IPTG诱导pET28agb1载体融合蛋白的表达4
2.6.3 包涵体蛋白的变复性4
2.7 融合蛋白的Ni柱亲和纯化及结果分析4 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$ 

2.8 Western Blot方法及结果分析5
2.9 CpHV1间接ELISA抗体检测方法的建立5
2.9.1 最佳血清稀释度的筛选5
2.9.2 血清作用时间5
2.9.3 最佳酶标二抗浓度的摸索5
2.9.4 酶标二抗反应时间的确定5
2.9.5 显色时间的探索5
2.10 临界值确定5
2.11 特异性试验5
2.12 重复性试验6
2.13 临床样品检测6
3 结果6
3.1 gB1 PCR最佳退火温度（Tm）6
3.2 重组质粒的构建与鉴定6
3.3 重组CpHV1 gB1蛋白的表达、鉴定6
3.4 纯化结果分析7
3.5 Western Blot结果分析7
3.6 间接ELISA反应条件的选择7
3.7 临界值确定8
3.8 特异性试验8
3.9 重复性试验8
3.10 临床样品检测8
4 讨论9
5 结论9
致谢10
参考文献11
图1 摸索CpHV1 gB1 PCR最佳退火温度的结果6
图2 重组质粒pET28agB1的双酶切鉴定6
图3 蛋白表达鉴定SDSPAGE 分析7
图4 蛋白纯化SDSPAGE 分析7
图5 重组gB1蛋白的Western Blot鉴定7
表1 最佳抗原包被浓度与血清稀释度的筛选8
表2 50份阴性血清检测结果8
山羊疱疹病毒1型gB基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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