猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是一种单股正链有囊膜的 RNA 病毒。开放阅读框3（Open reading frame 3, ORF3）基因是PEDV的附属基因，编码附属蛋白ORF3，有研究表明该蛋白与PEDV的毒力有关。为了研究ORF3基因在PEDV侵染机体过程中发挥的作用，本研究通过PCR扩增PEDV Dr13野毒株ORF3基因，并将其克隆至pJET1.2 blunt克隆载体，之后将其分别插入至原核表达载体pET32a和pXX-GST中，以制备重组表达质粒pET32a-ORF3和pXX-GST-ORF3，并对两个重组表达质粒进行双酶切鉴定，经测序确认无误后将重组表达质粒转化至感受态细胞BL21（DE3）进行ORF3蛋白的表达。结果表明，PEDV ORF3基因的克隆经PCR鉴定确认无误，所制备的两个重组表达质粒经双酶切鉴定确认无误，但是ORF3蛋白的表达条件仍需进一步优化。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1质粒及载体 2
1.1.2 试剂 3
1.1.3 仪器 3
1.2 方法 3
1.2.1 ORF3基因的扩增 3
1.2.2重组表达质粒pET32aORF3及pXXGSTORF3的构建 4
1.2.3 重组表达质粒pET32aORF3及pXXGSTORF3的双酶切鉴定 5
1.2.4 ORF3蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达 6
1.2.5 ORF3蛋白的SDSPAGE及WesternBlot鉴定 6
2 试验结果 7
2.1 ORF3基因扩增的鉴定 7
2.2 重组表达质粒pET32aORF3及pXXGSTORF3的鉴定 7
2.3 ORF3蛋白表达的鉴定 8
3 讨论 9
致谢 9
参考文献 11
PEDV ORF3基因的克隆及其原核表达载体的 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
构建

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