猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2, PCV2）是猪圆环病毒相关性系统疾病（PCV2-systemic disease, PCV2-SD）的主要病原，给我国的养猪业造成了严重的威胁和损失。PCV2 rep基因是病毒复制酶的编码基因，软件分析发现在其启动子区存在类Sp1位点，本研究构建了类Sp1位点突变的rep基因启动子测试载体，利用感染性克隆技术构建了PCV2类Sp1位点突变毒株，通过研究此位点对rep基因启动子活性及病毒复制效率的影响两方面探索此类Sp1位点是否具有生物学功能。启动子活性研究结果显示类Sp1位点突变后相对荧光素酶活性显著下降，说明此位点对rep基因启动子具有很大的影响。利用感染性克隆技术并未成功拯救出类Sp1位点突变毒株，说明此位点不仅影响rep基因启动子活性，还可能是病毒复制的关键位点。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 PCV2 rep基因启动子区类Sp1位点对启动子活性的影响 2
1.1.1 细胞、质粒、菌株、病毒2
1.1.2 工具酶和生化试剂2
1.1.3 主要仪器 2
1.1.4 病毒基因组的提取2
1.1.5 荧光素酶报告基因启动子测试载体的构建2
1.1.6 rep基因启动子区类Sp1位点序列突变4
1.1.7 重组质粒转染PK15细胞 4
1.1.8 荧光素酶报告基因实验4
1.2 PCV2 JN株感染性克隆的构建、病毒拯救及类Sp1位点基因突变病毒的构建 4
1.2.1 细胞、质粒、菌株、病毒、4
1.2.2 工具酶和生化试剂4
1.2.3 类Sp1位点基因突变病毒的构建5
1.2.4 病毒的体外环化5
1.2.5 DNA转染PK15细胞5
1.2.6 接毒5
1.2.7 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）6
2 结果与分析6 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 

2.1 PCV2 rep基因启动子区类Sp1位点对启动子活性的影响结果 6
2.2 PCV2 JN株感染性克隆及类Sp1位点基因突变病毒的构建、病毒拯救结果7
3 讨论 8
致谢8
参考文献9
PCV2 rep基因启动子区类Sp1位点
的生物学功能研究

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