鉴于H9N2 AIV对于我国家禽养殖业的危害以及其所引起的公共卫生安全问题，本文对一株鸡源的H9N2 AIV进行了全基因测序，同时还对该病毒对小鼠的致病性进行了研究。结果显示，该病毒的HA、NA、NP、PB2、PB1、PA、M基因均为 A/chicken/Shanghai/F/98-like，而NS基因与 A/chicken/Korea/38349-P96323/96位于同一分支上，因此该病毒属于L基因型。该病毒的 PB2基因的627位氨基酸已由禽源标志的E变为人源标志的K，并且对小鼠表现出一定的致病性。因此，对于家禽 H9N2 AIV的分子流行病学检测需要进一步加强，因为这不仅有利于家禽中H9N2禽流感的防控，而且还具有很重要的公共卫生学意义。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1材料与方法3
1.1毒株与实验动物3
1.2 H9N2禽流感病毒NJ06株全基因的扩增与序列分析 3
1.2.1引物 3
1.2.2 病毒RNA的提取3
1.2.3病毒RNA的反转录RT和PCR扩增4
1.2.4 电泳及测序4
1.3 H9N2病毒NJ06对小鼠的致病性试验4 1.3.1 H9N2病毒NJ06对小鼠的致病性试验 4
2 结果与分析 4
2.1 H9N2病毒NJ06株的全基因扩增和序列测定 4
2.2 H9N2病毒NJ06株的基因分析 4
2.2.1血凝素( hemagg luti n i n , HA)基因分析 4
2.2.2神经氨酸酶(neuramini dase , NA)基因分析 5
2.2.3核衣壳蛋白(nucleocapsid protein，NP)基因分析7
2.2.4多聚酶蛋白 2(polymerase protein2，PB2)基因分析8
2.2.5多聚酶蛋白1(polymerase protein1，PB1)基因分析8
2.2.6血清前白蛋白(prealbu *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
min，PA)基因分析 9
2.2.7基质蛋白(matrix，M)基因分析 9
2.2.8非结构蛋白(nonstructural protein，NS)基因分析10
2.3 H9N2流感病毒NJ06株对小鼠的致病性试验 10 3讨论 11致谢 11
参考文献 11
H9N2亚型禽流感病毒NJ06株的全基因序列分析及其对小鼠的致病性
引言
禽流感（Avian Influenza，AI）是由正粘病毒科（Orthomyxoviridae），A型流感病毒属，A型流感病毒中任一亚型引起的各种家禽及野生禽类感染和/或疾病综合征[11]。其病原通常称为禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV），病毒基因组由8个分节段单股负链RNA组成，编码至少10种病毒蛋白[1]。意大利的Perroncito于1878年首次详细的报道了禽类暴发类似禽流感的疾病，当时称为“鸡瘟”，于1955年最终证实该“鸡瘟”是由A型流感病毒引发的[2]。根据A型流感病毒表面糖蛋白血凝素蛋（Hemagglutinin，HA）和神经氨基酸酶（Neuraminidase，NA）的抗原性不同[10]，可分为不同的亚型，目前已发现有16种HA亚型和9种NA亚型[7]。禽流感病毒除依据抗原性分类外，还根据其致病性强弱，又有高致病力和低致病力禽流感之分[3]。迄今为止，所有高致病性禽流感均由H5和H7亚型毒株所引发的；而家禽中暴发的低致病力禽流感有H5、H7和H9亚型，其中危害最为严重的为H9N2 AIV[4]。
H9N2 AIV于1966年由Homme等首次从北美暴发禽流感的火鸡群中分离到，一直到20世纪90年代，该病毒仅限于部分地区局部流行，危害不大[5]。但自20世纪90年代以后，H9N2 AIV在亚洲地区广泛流行，并逐步扩散到世界各地，目前该病毒已在欧州、亚州和非洲的多个国家和地区的家禽中发展为地方流行，给当地的养禽业造成了严重的经济损失[6]。我国自1994年首次从鸡群中分离到H9N2 AIV以来，该病毒一直在我国的家禽中流行和传播，目前已发展为地方流行，给我国的养禽业造成了极大的经济损失。此外，H9N2 AIV除了感染家禽外，还可以感染猪和人，并且为感染人的H5N1和H7N9 AIV提供了6个内部基因片段，因而H9N2 AIV所诱发的公共卫生问题也越来越受到人们的关注。
疫苗接种是当前我国针对H9N2 AIV所采取的最普遍的防控手段[4]，而在疫苗的免疫选择压力下H9N2 AIV也在不断的发生重组和变异，这不仅给家禽中疫病的防控造成了困难，也给人类的健康造成了威胁。因此，对H9N2 AIV的流行情况进行实时监测，并搞清其遗传进化特点，不仅有利于家禽业的健康发展，而且还具有非常重要的公共卫生学意义。本文拟对一株从发病鸡中分离到的H9N2 AIV进行全基因测序，这将为H9N2 AIV的流行病学研究提供重要的试验数据。同时，我们还将通过小鼠模型来评价H9N2 AIV对哺乳动物的潜在致病性[2]，这将有助于H9N2 AIV的跨物种传播和致病机制的研究。
1 材料与方法
1.1毒株与实验动物
H9N2禽流感病毒（AIV）A/chicken/Nanjing/06/2003（NJ06）由江苏省农业科学院兽医研究所分离、保存。SPF鸡胚购自南京天邦生物科技有限公司。BALB/c小鼠（雌性）购自扬州大学实验动物中心。
1.2 H9N2禽流感病毒NJ06株全基因的扩增与序列分析
1.2.1引物 根据GenBank中所发布的H9N2禽流感病毒8个基因片段的序列，并通过引物设计软件Primer设计引物，用于H9N2禽流感病毒NJ06株全基因扩增[9]。引物序列见表1。
表1. RTPCR扩增H9N2禽流感病毒8个基因片段的引物序列
基因
上游引物
下游引物
(5’3’)
(5’3’)
HA
AGCGAAAGCAGGGG
AGTAGAAACAAGGGTGTTTT
NA
AGCGAAAGCAGGAGT
AGTAGAAACAAGGAGTTTTTT
NP
AGCAAAAGCAGGGTA
AGTAGAAACAAGGGTATTTTT
M
AGCAAAAGCAGGTAG
AGTAGAAACAAGGTAGTTTTT
NS
AGCAAAAGCAGGGTG
AGTAGAAACAAGGGTGTTTT
PB2前段
AGCGAAAGCAGGTCAAATATA
ATGGGTTCAATTCCCCAGTT
PB2后段
GGCAACCTCCAAACATTGA

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