视网膜神经前体细胞(RPCs)通过不对称分裂产生视网膜神经节细胞(RGCs)（视网膜最早发生的神经元类型），这一过程伴随着ath5基因（又名atoh7）转录活动的出现。尽管许多已有研究报道ath5转录因子对神经前体细胞产生视网膜神经节细胞是必要的，但迄今为止，尚无研究从单个ath5等位基因位点的视角去探究RPCs进行不对称分裂时ath5等位基因的转录激活是否存在不对称性， 而此种不对称性与之后的RGCs细胞命运会否发生关联。在此项研究中，我们对受精后24-30-36-48 小时不同发育时期的斑马鱼(Danio rerio)视网膜进行了冠状冰冻切片然后分别进行了RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)、DNA荧光原位杂交(DNA-FISH)以及两者相结合的Double荧光原位杂交实验(Double-FISH)。RNA-FISH结果显示，受精后36 h的视网膜中，ath5转录活动主要分布于视网膜中央，而随着视网膜发育进程，ath5转录活动将逐步推移至睫状边缘区。之后进行了Double-FISH实验，通过IMARIS软件进行单个细胞的三维重构，初步分析显示，RPCs进行不对称分裂时ath5等位基因的转录激活很可能存在着不对称性，可能会与神经发生中的不对称分裂及细胞命运决定（尤其是RGCs）相关联。
目录
摘要 3
绪论 4
视网膜基本结构 4
视网膜神经前体细胞不对称分裂 4
ath5对调控RGCs细胞命运很重要（必要条件） 5
不对称分裂的研究现状 6
1 材料与设备 7
1.1 试验材料 7
1.2 试验试剂 7
1.3 仪器 7
2 方法 7
2.1 冷冻切片 7
2.1.1 斑马鱼鱼卵的收集、固定和脱水 8
2.1.2 样品包埋 8
2.1.3 冷冻切片 8
2.2 RNAFISH 8
2.2.1 RNAFISH探针制备 9
2.2.2 RNAFISH探针杂交 10
2.2.3 杂交后洗涤和抗体孵育 11
2.2.4 TSA染色和DAPI染色 11
2.3 DNAFI *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
SH 11
2.3.1 DNAFISH探针杂交 11
2.3.2 杂交后洗涤和DAPI染色 13
2.4 DOUBLEFISH和IMARIS软件对单个细胞进行三维重构 13
2.4.1 RNAFISH部分 13
2.4.2 DNAFISH部分 13
2.4.3 IMARIS软件对单个细胞进行三维重构 13
3 结果与分析 14
3.1 收集斑马鱼鱼卵用于冷冻切片 14
3.1.1 斑马鱼幼体发育示意图 14
3.2 RNAFISH 14
3.2.1 RNAFISH探针制备 14
3.2.2 RNAFISH结果（冠状冷冻切片） 15
3.2.3 RNAFISH结果（矢状冷冻切片） 16
3.3 DNAFISH 16
3.3.1 DNAFISH实验结果 16
3.4 DoubleFISH 17
3.4.1 DoubleFISH结果(冠状冷冻切片) 17
3.4.2 IMARIS软件对单个细胞进行三维重构 18
4 讨论 20
致谢 22
参考文献 24
 ath5等位基因在斑马鱼

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