目的 应用CRISPR/Cas9构建microRNA基因敲除HepG2肝癌细胞系。 方法 设计针对人miR-210基因序列（NC_000011.10）的sgRNA引物，构建sgRNAs表达质粒载体。借助Lipofectamin 2000转染表达载体后，利用Blasticidin抗性筛选的方法得到miR-210敲除细胞。结果 基因测序和凝胶电泳表明，sgRNA重组质粒构建成功。有效地转染了Cas9表达载体，经多轮药物筛选得到耐药生长的癌细胞。 结论 成功构建重组表达载体pU6-sgmiR-210；获得成功表达Cas9载体，并耐药生长的HepG2细胞。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 方法 3
1.2.1细胞培养 3
1.2.2 构建识别miR210基因目标序列的sgRNA重组载体 4
1.2.3 细胞转染 6
1.2.4 细胞药物筛选 6
2 结果与分析 6
2.1 目标片段克隆 6
2.2 重组载体构建 6
2.2.1 微量分光光度计浓度检测6
2.2.2 菌液PCR验证7
2.2.3 基因测序比对7
2.3 转染细胞抗药性筛选8
2.3.1 细胞培养8
2.3.2 转染9
2.3.3抗药性筛选10
3 讨论 10
3.1 sgRNA重组表达载体构建10
3.2 细胞转染效率 11
3.3 CRISPR/Cas9优化 11
3.4 待解决问题 11
4 结论 11
致谢12
参考文献13
附录A溶液配方14
附录B克隆载体pKLVU6gRNA(BbsI)PGKpuro2ABFP 结构图14
附录C表达载体pSuper7T vector结构图15
基于CRISPR/Cas9构建miR210基因敲除He *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
pG2细胞
国家生命科学与技术人才培养基地班 阳志

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