：铜是参与生物体多种生命活动的重要元素，适量的铜元素对生物体生命活动的维持具有重要意义，但过量的铜元素对生物体有毒害作用，因此生物体维持自身铜元素稳态极为重要。Dyella jiangningensis SBZ3-12菌株具有矿物风化能力，能释放黑云母中的铁、硅、铝等元素，同时菌株具有较强的铜抗性。本研究通过对矿物风化细菌D. jiangningensis SBZ3-12全基因组分析鉴定，克隆其可能与铜抗性相关的基因copB。采用重叠延伸PCR以及同源重组双交换的方法敲除copB基因获得△copB突变株，铜抗性实验表明△copB突变株依然能够在含400 mg/L CuSO4的培养基上生长，与野生型相同。表明单独敲除copB基因对D. jiangningensis SBZ3-12的铜抗性没有明显影响。本研究为进一步探究菌株D. jiangningensis SBZ3-12耐受铜胁迫及维持体内离子平衡的机理提供了理论基础。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract. 2
Keywords 2
引言 2
1 材料与方法 3
1.1 材料 3
1.1.1 菌株和质粒 3
1.1.2 培养基和培养条件 4
1.2 方法 4
1.2.1 copB生物信息学分析 4
1.2.2 菌株Dyella jiangningensis SBZ312基因组总DNA提取 4
1.2.3 copB基因两翼区域的overlapping PCR 4
1.2.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 5
1.2.5 菌落PCR 5
1.2.6 大肠杆菌质粒抽提 5
1.2.7 敲除质粒pMIDcopB的构建 5
1.2.8 copB缺失突变株的获得 5
1.2.9 铜抗性实验 5
2 结果与分析 6
2.1 copB基因克隆与生物信息学分析 6
2.2 copB基因两翼区域的overlapping PCR 9
2.3 敲除质粒构建及△copB突变体的获得
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2.4 △copB的抗铜功能鉴定 13
3 讨论 13
4 结论 14
致谢 14
参考文献 15
基于Dyella jiangningensis SBZ312全基因组分析的铜抗性相关基因解析

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