禾谷镰孢菌是我国引起小麦赤霉病的主要病原菌。氰烯菌酯是一种新型的杀菌剂，化学结构新颖，作用机制独特，与现有的杀菌剂无交互抗性。该药剂在离体条件下，对小麦赤霉病菌的抑菌活性是苯并咪唑类杀菌剂多菌灵的4倍。目前，已经完成农业部的相关登记，已经成为防治小麦赤霉病主要药剂之一，并能够有效治理小麦赤霉病菌对多菌灵的抗药性。但是，本实验室的前期研究表明该药剂在离体条件下容易获得小麦赤霉病菌对氰烯菌酯的抗药性，因此认为其具有中等—高等的潜在抗药性风险。为此，进行小麦赤霉病菌对氰烯菌酯的抗药性机制的研究迫在眉睫，为科学制定该杀菌剂的应用策略，延缓抗药性的产生和建立抗药性群体检测技术具有重要意义。FGSG-05315是野生型禾谷镰孢菌2021经氰烯菌酯处理一定时间后表达量发生上调/下调的基因。为了揭示其在禾谷镰孢菌对氰烯菌酯抗药性中的作用，以氰烯菌酯表现高抗的菌株（JS399-19HR）Y2021A为出发菌株，采用Double-joint PCR方法，构建含hph-hsv分子标记的基因敲除突变体，并利用基因的上下游结合区和靶标基因序列进行了PCR验证。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 2
引言2
1 材料与方法3
1.1 供试菌株3
1.2 供试培养基3
1.3菌丝体获得3
1.4基因组DNA提取3
1.5 引物设计3
1.6敲除载体构建3
1.6.1载体同源臂扩增3
1.6.2载体筛选标记获得3
1.6.3载体构建3
1.7 敲出突变体PCR验证4
2 结果与分析5
2.1 载体同源臂扩增5
2.2敲除载体构建筛选标记扩增6
2.3禾谷镰孢菌 FGSG_05315 敲出突变体载体构建6
2.4禾谷镰孢菌FGSG05315敲出突变体获得转化子PCR验证7
3 讨论 8
致 谢 8
参考文献 9
禾谷镰孢菌抗氰烯菌酯相关基因FGSG_05315敲除突变体的构建

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