马铃薯甲虫是一种世界性检疫对象和重大外来入侵物种，在我国主要分布在新疆，可危害多种茄科作物，是马铃薯上最重要的害虫。保幼激素(Juvenile Hormone,JH)是一类保持昆虫幼虫性状和促进成虫卵巢发育的激素。保幼激素由咽侧体分泌，和蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)协同调控昆虫发育、变态与生殖。马铃薯甲虫的发育、变态、繁殖等受保幼激素和蜕皮激素的调控，但是保幼激素和蜕皮激素的调控机理有待进一步研究。之前有研究表明Groucho可能参与到保幼激素和蜕皮激素的信号通路中。本论文主要研究Groucho在马铃薯甲虫的保幼激素和蜕皮激素通路中的作用，实验者通过克隆得到Groucho全长序列并进行进化分析，确定该基因的时空表达模式，最后检测了Groucho对保幼激素和蜕皮激素信号的表达响应。本文结果为该基因功能的进一步研究奠定了基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1供试昆虫 2
1.2 实验材料和仪器设备 2
1.2.1 实验材料 2
1.2.2 仪器设备 3
1.3 马铃薯甲虫中Groucho基因全长序列的克隆 4
1.3.1 PCR引物的设计 4
1.3.2 PCR扩增目的片段 4
1.3.3 PCR产物的回收纯化 4
1.3.4重组载体的构建 5
1.3.5重组载体的转化与菌液培养 5
1.3.6菌液PCR与测序 5
1.3.7 5’RACE 扩增引物设计 6
1.3.8 RACE获得目的基因全长 6
1.3.9 RACE产物的回收、连接、转化、菌液培养和测序 7
1.4 马铃薯甲虫Groucho基因的生物信息学分析 7
1.4.1 氨基酸多重序列比对 7
1.4.2 进化树的构建 7
1.5 QPCR确定Groucho基因的时空表达模式和对保幼激素和蜕皮激素的表达响 8
1.5.1 QPCR引物的设计 8 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 

1.5.2 QPCR最适引物的验证 8
1.5.3 确定Groucho的时空表达模式 8
1.5.4 检测Groucho对保幼激素和蜕皮激素的表达响应 8
2 结果与分析 8
2.1 马铃薯甲虫Groucho基因的克隆 8
2.2 构建进化树进行进化分析，在分子水平研究物种之间的进化关系 8
2.3 Groucho基因多重序列比对 9
2.4 Groucho最适QPCR引物的确定 10
2.5 探究Groucho在马铃薯甲虫不同生长阶段的表达情况 11
2.6 探究Groucho对保幼激素和蜕皮激素的表达响应 12
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
Groucho基因的克隆、表达及对保幼激素和蜕皮激素的表达响应

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