马铃薯晚疫病是马铃薯生产过程中的一类毁灭性病害，容易造成大流行，导致巨大的经济损失。生产中防治晚疫病的打药频率高，使用杀菌剂来防治该病害对生态环境造成污染大，生产成本显著高。利用传统育种方式向植物中导入抗病基因R基因，是一种经济绿色的防治方式。在野生和栽培的马铃薯中存在的R基因,可以被特异病原体产生的效应分子激活，产生HR反应，阻止病原物侵染，为马铃薯提供天然的保护。本文研究的Rpi-vnt1基因也是一种来源于一种野生茄科植物（Solanum venturii）的R基因，多绝大多数晚疫病菌小种具有抗性功能，然而在栽培种马铃薯中也存在有这一基因，经过序列比对我们发现，这两个基因的序列具有很高出的同源性，但在某些氨基酸位点有所不同，本实验拟通过设计多个突变体，替换基因功能域，寻找对该基因抗性功能具有重要作用的关键性位点，为今后揭示该抗病基因的作用机理奠定研究基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1供试植物与菌株2
1.1.2菌体悬浮缓冲液体系2
1.1.3培养基与带抗性平板的制备2
1.2方法 2
1.2.1序列分析2
1.2.2基因克隆PCR3
1.2.3同源重组3
1.2.4菌落验证PCR3
1.2.5大肠杆菌DH5α与JM109感受态细胞的热激转化3
1.2.6 农杆菌GV3101感受态细胞的制备3
1.2.7农杆菌GV3101感受态细胞的电转化3
1.2.8农杆菌甘油菌的保存与活化4
1.2.9烟草中农杆菌介导的坏死反应4
1.2.10提取RNA4
1.2.11 反转录 4
2结果与分析5
2.1抗性马铃薯品种（SV）Rpivnt1基因 N端功能域对于其抗病性影响5
2.2将抗病马铃薯品种（SV）Rpivnt1基因部分功能域替换到感病马铃薯品种
（ST）Rpivnt1基因中对其抗病性影响6
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2.3提取表达烟草RNA，验证表达7
3讨论与展望 8
3.1可能是多个位点决定该基因的抗病性8
3.2 N端功能域对于抗病基因Rpivnt1基因的功能的作用8
3.3寻找影响抗病基因Rpivnt1抗性功能的关键位点对于农业生产具有
重大意义9
致谢10
参考文献10
马铃薯广谱基因Rpivnt1种间多态性及抗病机制研究

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