马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是马铃薯的毁灭性害虫，也是我国重要的外来入侵物种和对外重大检疫对象。马铃薯甲虫的发育、变态、繁殖等受保幼激素和蜕皮激素的协同调控。FoxO是保幼激素和蜕皮激素（20-羟基蜕皮酮）信号通路的交叉点。本文克隆得到马铃薯甲虫LdFoxO基因，其编码505个氨基酸，具有保守的Forkhead结构域。FoxO在脂肪体高表达，其他组织低表达。FoxO在每次蜕皮期间和四龄末期高表达，蜕皮间隔期低表达，这一表达模式与20E峰值同步。激素处理马铃薯甲虫后，发现LdFoxO的表达受20-羟基蜕皮酮的诱导，而受保幼激素的抑制。这些结果表明FoxO可能参与到保幼激素和20-羟基蜕皮酮的转导途径中。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 马铃薯甲虫的采集及饲养2
1.2 实验试剂和仪器设备 2
1.2.1 实验试剂2
1.2.2 仪器设备2
1.3 马铃薯甲虫FoxO基因片段的筛选和验证2
1.3.1 PCR引物的设计2
1.3.2 PCR扩增目的片段3
1.3.3 PCR产物的回收与纯化3
1.3.4 重组载体的连接4
1.3.5 重组载体的转化反应、细菌培养及单克隆的挑取4
1.3.6 菌液PCR检测4
1.4 马铃薯甲虫FoxO基因片段的全长序列克隆5
1.4.1 RACE引物的设计与合成5
1.4.2 RACE的反应体系和条件5
1.4.3 RACE PCR产物的回收、连接、转化、细菌培养及单克隆挑取5
1.5 马铃薯甲虫FoxO基因多序列联配及系统进化树构建5
1.5.1 氨基酸多序列对比5
1.5.2 进化树的构建6
1.6 荧光定量PCR 6
1.6.1 qPCR的引物设计6
1.6.2 实时荧光定量PCR反应6
1.6.3 FoxO基因的时间序列表达分析7 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 

1.6.4 统计分析7
2 结果与分析7
2.1马铃薯甲虫叉头转录因子FoxO基因的全长序列克隆7
2.2 马铃薯甲虫FoxO基因的生物信息学分析8
2.2.1 马铃薯甲虫FoxO基因的进化分析8
2.2.2 FoxO蛋白质序列的多重序列对比8
2.3 实时荧光定量PCR引物的确定9
2.4 马铃薯甲虫FoxO基因的特异性表达10
2.4.1 不同组织的特异性表达10
2.4.2 不同发育阶段的特异性表达10
2.5 保幼激素和蜕皮激素对FoxO基因的诱导表达11
2.5.1 保幼激素对FoxO基因的诱导表达11
2.5.2 蜕皮激素对FoxO基因的诱导表达11
3讨论12
3.1 FoxO基因对保幼激素的影响12
3.2 FoxO基因对蜕皮激素的影响12
致谢12
参考文献13
马铃薯甲虫叉头转录因子FoxO基因的克隆及其对保幼激素和蜕皮激素的表达响应

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/zwbh/561631.html