致病疫霉能引发马铃薯晚疫病和番茄晚疫病，具有爆发性、毁灭性、难防治的特点，是影响全球农业生产安全的重要植物病原物，但其致病机理至今未研究清楚。寄主抗病基因编码的核苷酸结合域-富亮氨酸(NLR)蛋白能直接或间接识别致病疫霉无毒基因编码的RxLR类蛋白，触发寄主植物的免疫反应，但有关NLRs蛋白与RxLRs蛋白间接互作的研究进展仍较少。目前已发现新型叶绿体激酶GLYK在植物体内广谱存在，被证实具有重要的激酶催化功能，本实验进一步确定了GLYK作为中间蛋白参与寄主Rpi-vnt1抗病受体识别致病疫霉Avrvnt1蛋白进而引发免疫反应的过程。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1供试植物与菌株2
1.1.2蛋白质裂解液体系3
1.1.3叶绿体Isolation Buffer体系3
1.1.4菌体悬浮缓冲液体系3
1.1.5 SDSPAGE胶的制备体系3
1.2方法 4
1.2.1基因克隆PCR4
1.2.2菌落验证PCR4
1.2.3 rTaq PCR4
1.2.4酶切反应4
1.2.5同源重组5
1.2.6 T4连接5
1.2.7质粒的提取5
1.2.8基因序列的碱基点突变5
1.2.9 DNA片段的胶回收6
1.2.10 RNA的提取6
1.2.11反转录RNA6
1.2.12蛋白质的提取6
1.2.13大肠杆菌超级感受态的制备7
1.2.14酵母感受态细胞的制备7
1.2.15酵母感受态细胞的转化8
1.2.16酵母双杂交（Y2H）8
1.2.17农杆菌GV3101感受态细胞的制备8
1.2.18农杆菌GV3101感受态细胞的电转化8
1.2.19烟草中农杆菌介导的瞬时表达9
1.2.20烟草体内免疫共沉淀（CoIP）实验9 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072# 

1.2.21 原核表达9
1.2.22 Pull down实验9
1.2.23 Western blot10
1.2.24考马斯亮蓝染色10
1.2.25烟草中病毒介导的基因沉默10
1.2.26培养基的制备10
2结果与分析11
2.1酵母双杂交鉴定GLYK与Avrvnt1蛋白互作11
2.2大肠杆菌中的GLYK与Avrvnt1蛋白互作12
2.3烟草中的GLYK与Avrvnt1蛋白互作13
2.4GLYK参与调控植物Rpivnt1对致病疫霉Avrvnt1的识别14
3讨论与展望15
3.1烟草CoIP实验结果与其它实验结论不符15
3.2GLYK对Rpivnt1抗病过程的调控具有特异性16
3.3GLYK在快速有效利用广谱抗性基因Rpivnt1中发挥的作用16
3.4下一步工作展望16
4结论17
致谢18
参考文献19
叶绿体激酶GLYK在致病疫霉无毒基因Avrvnt1和寄主Rpivnt1介导的抗病过程中的功能研究

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