:着丝粒特异组蛋白CENH3位于真核生物的功能着丝粒中，是有活性动粒染色质最基本的特点之一。该蛋白由CENH3基因编码，与普通的H3基因存在明显差异。拟南芥CENH3基因(HTR12)的缺失或突变会引起减数分裂异常，从而导致植株育性降低甚至不育。同时，CENH3基因突变植株明显矮化，该表型变化主要与细胞数量的减少有关。本文克隆了拟南芥的着丝粒特异基因HTR12，分别构建两个关键氨基酸位点的点突变植物表达载体以及一个植物表达双突变载体，裂解拟南芥叶片获得原生质体，然后用PEG诱导方法成功将构建好的载体转入其中，并检测到该基因表达于核内。同时通过蘸花法对拟南芥植株进行遗传转化，转化结果表明转基因植株呈现整体偏黄等异常特征。该基因的研究有利于有利于阐明特异性着丝粒组蛋白功能的正常发挥的分子基础，为下一步的研究提供分子生物学实验，并有利于植物单倍体的构建。
目录
摘要 1
关键字 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 3
1.1材料 3
1.1.1材料 3
1.1.2 载体和菌株 3
1.1.3 实验试剂 3
1.2 实验方法 6
1.2.1 拟南芥植株的培育 6
1.2.2 RNA提取 6
1.2.3 获取目的基因 6
1.2.4 同源重组 7
1.2.5 感受态细胞的转化 8
1.2.6 测序并提取质粒 8
1.2.7 原生质体的制备和瞬时转化 8
1.2.8 蘸花法进行拟南芥植株转化 9
2 结果与分析 10
2.1 拟南芥CENH3基因及关键氨基酸位点突变克隆 10
2.1.1 目的基因的获得 11
2.1.2 检验pCAMBIA1305HTR12GFP载体 11
2.2 利用拟南芥原生质体瞬时转化进行基因表达分析 11
2.3 转基因拟南芥植株的获得及表型观察 11
3 讨论 12
致谢 12
参考文献 12
拟南芥 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
着丝粒基因关键氨基酸位点突变
载体构建及表达分析

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