以32个优良葡萄品种的叶片为供试材料，通过6对特异性引物对优良葡萄品种的MybA1和MybA2着色位点进行鉴定，确定其基因型组成及单倍型类型。结合父母本在Myb着色位点的单倍型进行色泽遗传规律的分析。浆果成熟期对葡萄果实进行生理指标的测量。结果表明，在调查的32个优良葡萄品种中，红色品种有22个，绿色品种有10个，这与利用葡萄叶片鉴定结果一致，在其中共鉴定出5种单倍型类型，分别是A、AC-Rs、ABE1、ABE2、ABE1E2。其中，单倍型构成中只有单倍型HapA类型的葡萄果皮为绿黄色或黄绿色，而含有HapC-Rs、HapE1、HapE2类型的葡萄果皮颜色为鲜红色、紫红色或者接近紫黑色。此外，含有功能基因的单倍型数量越多，果皮的颜色越深。对32个葡萄品种的色泽遗传规律分析结果表明，红色葡萄品种的父母本中至少有一个具有有功能的基因位点，绿色品种中父母本均不含有有功能的基因位点。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key words 3
引言 3
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.1.1 植物材料 4
1.1.2 菌体材料及载体 4
1.1.3 各种酶及试剂 4
1.1.4 主要仪器设备 4
1.1.5 引物的合成 4
1.2 方法 5
1.2.1 DNA提取 5
1.2.2 葡萄MYBA1和MYBA2基因位点的PCR扩增 5
1.2.3 目的基因的胶回收 5
2 结果与分析 6
2.1 32份优良葡萄品种果实色泽性状及生理指标的调查 6
2.2 32份葡萄种质MYBA1和MYBA2基因位点基因型的鉴定 9
2.2.1 32份葡萄品种DNA质量的检测 9
2.2.2 32份葡萄种质MYB基因型鉴定 9
2.2.3 32份葡萄种质MYB基因型结果与分析 11
2.3 优良葡萄品种MYB基因型遗传规律的分析 12
3 讨论 14
致谢 15
参考文献 15< *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
br /> 调控葡萄果实着色MYB类调节基因的单倍型鉴定
引言
引言：葡萄属于葡萄科（Vitaceae Lindl.）葡萄属（Vitis L.）多年生落叶藤本植物[1]。在全世界的果品生产中，葡萄的产量及栽培面积一直居于前列，它可以鲜食、可以制干、可以酿酒也可以制成果汁，有着极高的经济价值[2]。葡萄色泽是衡量鲜食葡萄质量的一项重要的外观指标,也是葡萄品种选育的重要目标性状，而花色苷又是决定葡萄果皮色泽的主要物质［3］。花色苷的生物合成需要两类基因的参与，一类是结构基因，编码直接参与花色苷合成与积累的酶；另一类是调节基因，调控结构基因的时空表达［45］。目前，葡萄果皮颜色形成机理的研究主要集中在MYB转录因子的调控方面［6］。MYB相关基因对葡萄花色苷合成的调控起到至关重要的作用，在不同种群与品种中表现出多种模式［7］。FournierLevel［8］等证明，位于2号染色体上的由3个MYB相关基因组成的基因簇是决定欧亚种葡萄果皮颜色的基因位点，其中MYBA1和MYBA2对花色苷的合成具有调节功能， MYBA3的表达与花色苷的合成在统计分析上具有相关性，但功能尚不清楚。MYBA1位点等位基因有5个，分别是VvmybA1a、VvmybA1b、VvmybA1c、VlmybA13和VvmybA1SUB，其中VvmybA1SUB和VvmybA1a是无功能的［9］。MYBA2位点等位基因有VvmybA2r和VvmybA2w两种等位基因，此外，在一些欧美杂种葡萄中在MYBA2位点还存在等位基因VlmybA2和VlmybA12，4个等位基因中只有VvmybA2w是无功能的。决定果实颜色的MYBA1和MYBA2基因位点在一定程度上是共连锁的，这种共连锁的基因称为一个单倍型（Haplotype简称Hap）［1011］。单倍型是单倍体基因型的简称，在遗传学中是指同一染色体上可进行共同遗传的多个基因位点等位基因的组合。研究发现具有不同单倍型葡萄品种的果皮中的花色苷含量及组成也不同。MYBA1和MYBA2基因位点上的基因型构成的单倍型的多样性，决定了葡萄果皮色泽的不同。不同葡萄品种MYBA1位点的5种等位基因与MYBA2位点的4种等位基因在不同品种中形成了多种单倍型组成。本试验在前人研究的基础上，利用特异性引物序列鉴定MYBA1和MYBA2基因位点的基因型确定其单倍型组成，进而预测果实色泽，能够实现对果实色泽性状早期筛选，使后代群体中满足育种目标或是接近育种目标的优株比例大大提升，达到缩短育种年限以及提高育种效率的目的。本研究的相关结果将为葡萄果实色泽性状的分子设计育种提供重要理论依据。
1 材料与方法
材料
1．1．1 植物材料
本研究中的32份优良种质材料来源于中国农业科学院郑州果树研究所国家果树种质郑州葡萄资源圃，采集幼嫩的叶片液氮处理后80℃低温保存。
1．1．2 菌体材料及载体
本研究中所用的菌株为大肠杆菌（E.coli）DH5α为本实验室保存，克隆载体为 pMD19T购自TaKaRa生物工程（大连）有限公司。
1．1．3 各种酶及试剂
Marker DL2000、Ex Taq酶、dNTP等PCR相关试剂购于TaKaRa（大连）公司；DH5α购自上海捷瑞生物工程有限公司；DNA凝胶回收试剂盒（AXYGEN）、质粒小量制备试剂盒（AXYPREP）购自南京秣氡基因工程有限公司；氨苄霉素（Amp）购自南京寿德试验器材有限公司；LB培养基、CTAB、Tris、EDTA等生化试剂为进口或国产分析纯，购于Solarbiod®公司。
1．1．4 主要仪器设备
试验中用到的仪器有高速冷冻离心机、超净工作台（苏州净化，SWCJ1FD）、微波炉、全自动凝胶成像分析仪（培清JS680D）、Eppendorf移液枪（1 mL、100 μL、20 μL、10 μL）、琼脂糖水平电泳槽（六一，DYCP31CN）、电泳仪电源（六一，DYY1C）、恒温水浴锅、Eppendorf PCR仪、灭菌锅（日本三洋SANYO，MLS3750）。
1．1．5 引物的合成
表1 PCR扩增MYBA1和MYBA2基因位点的等位基因的引物

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/yy/564322.html