蝴蝶兰是重要的年宵花之一，其花期调控是生产过程的关键。FT基因是促进植物从营养生长到生殖生长的转变的一个关键性基因。本研究课题选择了3个蝴蝶兰PhFT-like家族基因， 对其进行了异源表达及功能分析。主要研究结果如下 将PhFT2, PhFT3, PhFT4这3个基因分别构建过表达载体，利用蘸花法转化拟南芥，通过潮霉素抗性筛选以及PCR鉴定，获得转化的拟南芥株系。通过对 T2 代拟南芥株系进行表型观察和分析，结果显示 PhFT3在拟南芥中异源过表达促进提早开花，而 PhFT2和PhFT4 基因与对照相比并无显著的促进开花的效应。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法 2
材料与试剂 2
材料与试剂2
所用试剂2
1.2 试验方法2
1.2.1拟南芥材料准备2
1.2.2蘸花法转化拟南芥3
1.2.3转基因拟南芥的筛选与鉴定3
1.2.3.1转基因拟南芥株系RNA提取4
1.2.3.2总RNA样品电泳质量检测 4
1.2.3.3转基因拟南芥株系的内参基因扩增 4
1.2.4转基因拟南芥的移栽5
1.2.5转基因拟南芥抽薹时间和莲座数量统计5
2结果与分析 6
2.1转化拟南芥的筛选6
2.2转基因拟南芥的鉴定 6
2.3 蝴蝶兰PhFT基因转化拟南芥的表达分析6
2.4蝴蝶兰PhFT基因转化拟南芥的表型统计7
3.讨论与结论9
致谢9
参考文献9
蝴蝶兰PhFT基因对拟南芥的遗传转化及转基因植株表型分析
引言
蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属（Phalaenopsis spp.）植物，原产热带雨林地区，因其花型奇特，颜色丰富，深受各国人民的喜爱，有“洋兰皇后”之称。现已广泛载培于世界各地。在我国蝴蝶兰除作为年宵花销售需求量较大之外，一年四季的消费量也逐年增加。蝴蝶兰在我国也有着非常美好的寓意，蝴蝶兰寓意为高洁和清雅 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
，不同花色和花型寓意都不尽相同，白花寓意爱情纯洁、友谊珍贵；红心寓意鸿运当头、永结同心；红色的寓意为仕途顺畅、幸福美满；而条纹和斑点型的寓意为事事顺心、心想事成。近年，随着我国经济的发展，人们对蝴蝶兰的需求也越来越多，蝴蝶兰生产也具有非常大的发展空间。
由于蝴蝶兰生长周期比较长，从定植到开花需要1824月左右的时间，因此温室成本成本较高，目前蝴蝶兰开花主要通过低温处理温度的措施，即采用低温诱导的技术促进其开花，如利用空调、喷雾或高山处理等降温的措施可以对已经发育成熟的蝴蝶兰植株进行低温的处理，处理条件为昼温下2527℃，夜温下1820℃，昼夜温差需要保持在68℃，低温处理大约3045d即可完成花芽分化，但低温处理生产成本较高，只有一些地区采用高山栽培的方式才能实现低成本低温诱导。而且蝴蝶兰的大量供应时间为春节时期，因此，如何缩短蝴蝶兰的生长周期以及如何降低成本地实现周年供应是我们需要解决的重要问题。因此，利用分子生物学技术来分析蝴蝶兰的开花机制，将会为解决这些问题提供新的思路。
FT基因是植物开花调控过程中的关键基因，FT 蛋白也被称为“开花素”。研究表明FTLike基因的异源表达有着非常明显的促花效应（Cai et al., 2015）。其中，也有着一部分 FT 基因的功能在进化的过程中发生了变异，变成了阻遏开花因子，与 TFLLike 基因的功能一致。蝴蝶兰基因组及转录组相关信息的公布也为蝴蝶兰开花机理的研究提供了便利。通过基因组和转录组分析发现，蝴蝶兰中共有 8 个FT/TFL1 同源基因，通过序列比对及系统进化树分析发现，其中 7 个属于 FTLike 分支，1 个属于 MFTLike 分支。目前，蝴蝶兰中已经报道 2 个 FTLike 基因，其他余PEBP 家族成员基因未报道。本研究在已有研究基础上，选择了3个蝴蝶兰PhFTlike家族基因转化拟南芥，分别是PhFT2, PhFT3, PhFT 4，获得了转基因植株，并初步探讨了不同的FT基因的功能及其表达特征，为深入研究和利用 FT 基因调控蝴蝶兰的开花提供参考。
1．材料与方法
1．1 材料与试剂
1．1．1 试验材料
野生型拟南芥为哥伦比亚生态型（Col），菌株：大肠杆菌感受态 DH5α 购自大连宝生物工程有限公司（Takara 公司），本实验室自制的农杆菌感受态 EHA105。
1．1．2 所用试剂
2x Taq Master Mix 扩增酶购买自南京诺百欣科技有限公司，潮霉素（Hyg）、 卡那霉素（Kam）、利福平（Rif）、琼脂、蔗糖等均购自生工生物工程（上海）有限公司。β巯基乙醇(上海麦克林生化科技有限公司)；10×Loading Buffer (宝日医生物技术有限公司)；GelRed荧光染料(美国Biotium公司)；反转录试剂盒TransScript Ⅱ OneStep gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix、DL2000 DNA Marker(北京擎科新业生物技术有限公司)。
1．2 试验方法
1．2．1 拟南芥材料准备
拟南芥种子经表面灭菌后即可进行无菌播种。将拟南芥种子去除表面杂质，筛选干净后， 放于 2 mL 的离心管内，然后加入含有 0.03%曲拉通的75%浓度的乙醇，再浸泡消毒3 min，然后用70%乙醇洗涤 3 次，再用无菌水洗涤 45 次。把拟南芥种子均匀地播种于 MS 固体培养基中（含有 6.5 g/L 琼脂粉，1%蔗糖，pH5.8），培养皿密封良好后放入 4℃的冰箱避光春化处理 3d，然后放到光照培养箱内正常培养。培养条件为白天 16h / 22℃，黑夜 8h / 20℃。拟南芥播种后大约15d便可移栽。栽培方式为水培，用镊子小心地夹取拟南芥幼苗，先用湿润的海绵包裹幼苗的根系，然后小心塞入泡沫板（注意不能损伤拟南芥根系），再放到培养液中，然后放入光照培养箱中培养，定期更换营养液。培养液配方为1/4Hogland营养液。

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