本研究利用生物化学、分子生物学和生物信息学手段来研究脱落酸含量及其合成代谢相关基因在葡萄芽休眠过程中的动态变化。结果发现脱落酸含量在11月到次年4月间呈动态的先上升然后下降趋势，通过体视显微镜观察发现，葡萄芽的休眠在次年3月开始有解除的迹象，而在4月便开始萌发。说明脱落酸代谢促进了葡萄芽休眠的解除。利用实时定量PCR等技术进行验证，发现脱落酸合成代谢的关键基因为NCED、ABA、CYP707A，其中ABA4基因是脱落酸的合成限速基因。以上研究揭示了葡萄芽休眠期间脱落酸含量的变化及其相关基因的表达谱特点，为进一步分析脱落酸相关基因在葡萄芽休眠动态网络中的作用提供一定的数据基础，发掘其关键基因，从而为揭示葡萄芽休眠的分子机制奠定一定的基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.1植物材料2
1.1.2分子生物学试剂2
1.1.3仪器设备3
1.2葡萄芽形态观察 3
1.3葡萄芽内源脱落酸含量测定3
1.3.1样品前处理3
1.3.2检测波长的选择3
1.3.3色谱条件的选择3
1.3.4标准曲线制备3
1.3.5测定方法3
1.4葡萄脱落酸合成代谢途径相关基因的获取与序列比对3
1.5葡萄脱落酸合成代谢相关基因表达分析3
1.5.1利用RNAseq数据分析不同时期脱落酸合成代谢差异显著基因3
1.5.2总RNA的提取3
1.5.3 RNA完整性及纯度检测3
1.5.4葡萄芽的cDNA合成4
1.5.5荧光定量PCR4
2 结果与分析4
2.1 葡萄芽休眠期间ABA含量4
2.2葡萄芽休眠期间形态学变化5
2.3 ABA合成代谢途径相关基因的识别5
2.4 ABA合成代谢途径相关基因的进化分析7
2.5 ABA合成代谢途径相关基因的表达分析8
2.6 RN *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
A提取及质量分析9
2.7 ABA合成代谢途径相关基因的定量PCR9
3讨论 11
致谢 12
参考文献12
脱落酸含量及其合成代谢相关基因在葡萄芽休眠过程中的动态变化
引言
植物休眠是指植物体或其器官在发育的某个时期生长和代谢暂时停顿的现象。芽休眠是指含有分生组织的植物结构可见生长的暂时停止［1］。芽休眠是植物长期的发育进化过程中形成的，对于不良环境条件及气候条件形成的一种生物学适应，是一种有益的生物学特性。休眠使芽避开不利的环境条件，而在适宜的环境条件下萌发，休眠芽对外界环境的抵抗力很强，能在恶劣的环境条件中存活下来，表现为一种十分重要的适应性，通过这种适应性物种得以不断生存、发展和进化［2］。
芽休眠的影响因素可分为环境因素和生理因素：环境因素包括日照、温度和水分，生理因素包括激素、糖、多胺、酶以及其他化学物质［3］。在葡萄芽休眠的过程中，涉及到许多信号分子，其中激素是最为关键的一类，它是通过调节各种代谢而影响休眠的，各类激素对葡萄芽休眠的影响如下：
生长素：低浓度的生长素能够促进芽的萌发，但高浓度生长素却抑制了芽的萌发［4］。
脱落酸：脱落酸并不是决定芽休眠的唯一因素或抑制剂，其作用只有在其他内源激素的密切配合下才能表现出来［5］。
细胞分裂素：细胞分裂素在芽休眠过程中起到“解抑作用”，但只有在脱落酸等抑制物质存在时，细胞分裂素的存在才是必要的［6］。
乙烯：乙烯被认为也是诱发果树芽休眠的内源激素之一，它通过调控ABA的代谢和信号传导途径对ABA产生拮抗作用［7］。
赤霉素：赤霉素与芽休眠和萌发的关系十分密切，是主要的调节因子，可抑制芽的休眠、促进萌发［8］。
葡萄是我国产量第一的水果，在我国栽培历史悠久，现有栽培面积800多万亩以上，是我国的主要果树之一，为我国经济尤其是农村经济的发展作出了很大的贡献。葡萄芽休眠是葡萄重要的生命活动之一，对于葡萄花芽分化和产量都具有直接影响。关于葡萄芽休眠的研究［9］，国内外的研究学者都从分子生物学层面挖掘出了葡萄芽休眠及解除的一些相关机制。Tao［10］等利用Illumina RNAseq系统进行了"Shine Muscat"葡萄芽的转录组和差异转录表达分析，提出了关于葡萄芽休眠的分子机制的假设。闵卓［11］等构建了“赤霞珠”葡萄冬芽和夏芽的抑制消减cDNA文库，确定线粒体蛋白基因、未知蛋白基因、开花相关基因、ATP合成酶β亚基基因、MADs FLClike蛋白基因等与葡萄芽休眠具有一定的相关性；OR［12］等通过对单氰胺打破葡萄芽休眠早期基因表达水平的变化进行分析，证实了GDBRPK基因的调控作用；KEILIN［13］等分别构建了葡萄芽自然发育过程和人工破眠处理后幼嫩芽和成熟芽基因表达文库，筛选出了大量的与休眠相关的EST。
已有的研究报导也指出，脱落酸的变化与葡萄芽休眠之间也存在着一定的联系［14］。所以分析研究葡萄芽休眠过程中脱落酸含量的动态变化，对脱落酸合成代谢相关基因的序列分析和表达分析可以为系统研究脱落酸对葡萄芽休眠这一生理活动的作用提供一定的帮助。而生物化学、分子生物学和生物信息学的迅猛发展，也为这些研究提供了很多可行的技术手段。本研究拟观察11月至次年4月葡萄芽休眠过程中表型变化、测定内源脱落酸的含量、分析脱落酸合成代谢相关基因序列特征和表达特点，为深入研究脱落酸与葡萄芽休眠解除提供一定的帮助。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 植物材料
“白罗莎”葡萄的6个不同时期（2017年11月20号、12月20号、2018年1月20日、2月20日、3月20日及4月20日）的葡萄芽取枝于江苏省农博园。取枝后削下所需芽，量横纵经再液氮速冻，置于70℃保存备用。

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