细胞分裂素受体是接收并传递细胞分裂素信号的关键。森林草莓有4个细胞分裂素受体基因，但目前对其在森林草莓生长发育过程中的作用的研究十分缺乏。实验前期通过三个载体分别对细胞分裂素受体基因2a和2b、细胞分裂素受体基因3和细胞分裂素受体基因4,进行RNAi干扰，得到转基因株系；并进一步对干扰细胞分裂素受体基因2a、2b和细胞分裂素受体基因3的转基因森林草莓的花粉发育进行观察、鉴定和分析。收集野生型和细胞分裂素受体基因2a、2b和细胞分裂素受体基因3受到干扰的转基因森林草莓不同株系的花粉，进行显微镜观察、花粉染色、切片制作，以及花粉萌发等实验，总结统计出野生型和转基因型的花粉败育比例，初步探讨细胞分裂素受体基因2a、2b，细胞分裂素受体基因3在森林草莓花粉中的作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1森林草莓细胞分裂素受体基因RNAi干扰株系的获得2
1.1.1基因查寻2
1.1.2构建RNAi载体2
1.1.3森林草莓转化实验3
1.1.4 GUS染色法筛选阳性植株4
1.2统计森林草莓花粉败育比例4
1.3森林草莓花粉萌发实验4
1．4 森林草莓花粉切片制作5
2 结果与分析6
2.1森林草莓细胞分裂素受体基因RNAi干扰株系的获得6
2．1．1森林草莓细胞分裂素受体基因的鉴定6
2．1．2森林草莓RNAi载体的构建结果6
2．1．3森林草莓转化结果 7
2．1．4 GUS染色结果7
2．2 森林草莓花粉镜检照片7
2．3 森林草莓花粉萌发实验结果8
2．4 森林草莓花粉败育比例统计结果8
2．5 森林草莓花粉囊切片结果9
3讨论 9
致谢 10
参考文献 10
细胞分裂素受体基因对森林草莓花粉发育的影响
引言
引言：本实验旨在研究细胞分裂素受体基因对草莓花粉发育的影响。细胞分 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
裂素是一种重要的植物激素。它在抑制叶片衰老、吸引养分运输、参与顶端优势、打破芽休眠、调节花果发育和种子萌发等方面起着重要的生理作用。此外，细胞分裂素还参与光调节的一些生理过程，包括叶绿体分化、子叶扩张和自养代谢[1]。早在20世纪50年代，科学家发现，在酵母中添加酵母抽提物可促进果肉的分裂。其后，SKOG和Miller发现，未分化的愈伤组织中一定比例的细胞分裂素和生长素可以作为根茎培养，提出了植物形态发生中的生长素细胞分裂素假说，认为细胞分裂素和生长素在植物形态发生中起着非常重要的作用，影响根和茎的形成和随后的生长。野生型细胞分裂素的细胞分裂素含量仅为3%～4%，茎尖分生组织受到抑制，茎比野生型小，茎节长。这表明细胞分裂素在植物分生组织和形态发生中起着重要的调控作用[2]。细胞分裂素与植物生长发育密切相关。它不仅增强了细胞分裂，促进了植物在地上的分化，诱导叶绿体分化，抑制了叶片衰老，而且在种子发育和果实生长中起着重要作用[3]。本试验选取草莓作为实验材料，草莓为多年生草本、1040厘米高。茎高小于叶或几乎相等，密被覆盖，蔓延黄短柔毛。叶有三叶，叶具短茎，粗壮的纹理，倒卵形或菱形，深绿色，少数无毛，浅绿色，疏生羊毛状毛，沿着脉；叶柄密被带黄的毛。花序下面有短的聚伞花序叶柄；花两性；萼片卵形，稍长于花萼；花瓣白色，近圆形或卵形卵形。聚合果大，宿存萼片直立，接近果；瘦果卵形，平滑[4]。花期4～5个月，果实期6～7个月。草莓作为一种极受欢迎的水果，同样还具有很高的经济价值[5]。因为草莓果实含有丰富的营养成分，它们可以生吃或加工成食物，如果酱、调味品等。草莓具有速效的优势，第一年种植，第二年将收获，第三、第四年进入高峰时期，管理好的每亩单产在数千斤，成熟于初夏，早于一般水果市场，独占水果市场，经济价值更实惠[6]。
二倍体森林草莓是自花授粉植物。基因纯合度高,基因组小,遗传基础单纯,用理化因素处理突变率高,容易获得各种代谢功能的缺陷型,是改良现代栽培草莓的重要基因资源,因此更适合作为本实验的实验材料[7]。本实验以前人对拟南芥细胞分裂素受体基因的研究为基础，鉴定得到森林草莓中的4个细胞分裂素受体基因，并利用转基因RNAi进行干扰。实验前期观察到细胞分裂素受体基因4受到干扰的转基因森林草莓株系花粉败育，因此本论文研究其他3个细胞分裂素受体基因，即细胞分裂素受体基因2a和2b、细胞分裂素受体基因3受到干扰的转基因森林草莓株系的花粉发育情况。通过与野生型及细胞分裂素受体基因4受到干扰的转基因森林草莓株系相比较，探讨不同细胞分裂素受体基因在森林草莓花粉发育中的作用。
1 材料与方法
1．1 森林草莓细胞分裂素受体基因RNAi干扰株系的获得
首先，以拟南芥细胞分裂素受体基因的序列为基础，查找鉴定森林草莓细胞分裂素受体基因。然后，根据不同细胞分裂素受体基因的序列，构建特异性RNAi干扰载体；并进行草莓转化。通过GUS染色的方法对植株进行筛选，得到阳性植株来进行种植。
1．1．1 基因查寻
利用拟南芥三个细胞分裂素受体的氨基酸序列在草莓蛋白库中进行比对，获得2个AHK2受体，1个AHK3受体，1个AHK4受体。
1．1．2 构建RNAi载体
选取RNAi片段：
选择AHK2a和AHK2b共同的300bp以及AHK3的210bp，分别构建AHK2a、AHK2b和AHK3的RNAi载体。
构建过程：
于冰水浴中配制如下反应体系（表1）。如果不慎将液体粘在管壁，可通过短暂离心使其沉入管底[8]。
表1 RNAi载体构建重组反应体系
反应物
剂量
ddH2O
Up to 20 μl
5 × CE II Buffer
4 μl
线性化克隆载体
50200 ng

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/yy/561441.html