森林草莓有4个细胞分裂素受体基因。实验通过运用三个载体分别对细胞分裂素受体基因2（包括FveHk2a和FveHk2b）、细胞分类素受体基因3（FveHK3）和细胞分裂素受体基因4（FveHK4）,进行RNA干扰，得到转基因株系。收集野生型和三种转基因森林草莓不同株系的新鲜叶片，分别在外源施加和非外源施加细胞分裂素的条件下，进行黑暗处理，在处理不同天数后，拍照记录叶片衰老情况、收集叶片检测其叶绿素浓度，比较野生型和转基因叶片衰老程度的差异。结果发现，通过RNA干扰细胞分裂素受体基因4得到的转基因株系（4R）叶片在黑暗处理下的衰老较野生型叶片显著延缓；而通过RNA干扰细胞分裂素受体基因2得到的转基因株系（2R）叶片在黑暗处理下的衰老较野生型叶片有一定程度的提前。因此，细胞分裂素受体基因2和4很可能在森林草莓离体叶片在黑暗诱导的衰老中起到重要的作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）13
1 试验材料与方法35
1.1试验材料与试剂 3
1.1.1试验材料3
1.1.2主要仪器设备3
1.1.3主要试剂3
1.2试验方法 35
1.2.1转基因株系的获得过程4
1.2.2 GUS染色法检测转基因植株45
1.2.3叶绿素含量测定5
2 结果与分析58
2.1转基因株系的获得 56
2．1．1 转基因株系获得的过程5 6
2．1．2 GUS染色法检测转基因植株结果 6
2.2野生型与转基因草莓衰老程度比较68
2．1．1 野生型与转基因草莓离体叶片在黑暗条件下的衰老67
2．1．2 野生型与转基因草莓叶片中叶绿素含量的比较78
2．1．3 WT和4R株系在不同浓度细胞分裂素处理下的现象及分析8
3 讨论89
致谢9
参考文献910
细胞分裂素受体基因在森林草莓叶片衰老中的作用
引言
引言 草莓产量居世界小浆果首位，由于其具有柔 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
软多汁、酸甜适度、营养丰富、外观美丽、香气浓郁等特点，被世界各国人所喜爱，具有很高的经济价值和广阔的前景。相对其他水果而言，草莓是一种投资不多、收益较高的经济作物【12】。市场上的草莓一般是八倍体、四倍体。但是由于八倍体、四倍体草莓的基因数目较多，研究难度较大，因此，相对而言，以二倍体森林草莓作为研究对象，对其进行各种实验和测试，难度较小。而且除了果实大小不同之外，森林草莓在花结构、花器官排列和早期果实发育等方面的特性均与栽培草莓基本相同，因此是研究栽培草莓的理想模式植物。
草莓叶片的衰老时间与草莓的产量和品质息息相关，延缓草莓叶片衰老能提高草莓的产量和品质。细胞分裂素是一类促进细胞分裂、诱导芽的形成并促进其生长的植物激素。主要分布于进行细胞分裂的部位，如茎尖、根尖、未成熟的种子、萌发的种子、生长着的果实内部【3】。植物体的内源细胞分裂素对植物生长发育的诸多方面都有重要的调控作用，如叶绿体分化、叶片衰老、养分运输、茎尖分生组织的形成与分化、顶端优势、芽休眠的解除等【46】。细胞分裂素最明显的生理作用有两种：一是促进细胞分裂和调控其分化。在组织培养中，细胞分裂素和生长素的比例影响着植物器官分化，通常比例高时，有利于芽的分化；比例低时，有利于根的分化。二是延缓蛋白质和叶绿素的降解，延迟衰老。主要可以从3个方面通过调节细胞分裂素影响植物衰老：①植物衰老过程中内源细胞分裂素含量变化；②外源细胞分裂素的影响；③转入与细胞分裂素的合成、降解相关的基因对植物衰老产生的影响【7】。
植物叶片衰老是植物生长发育的结果,衰老是生理和分子水平的一系列连续变化过程，可以分为起始、衰退和终末三个阶段【8】。叶片衰老最明显的表现之一发生黄化作用，黄化作用是由于叶片中叶绿素含量降低而引起的。有人对植物衰老过程中叶片的形态结构、生理生化产生的一系列变化进行了深入研究,提出了许多假说和理论【7】。如随着植物的衰老，我们可以发现植物细胞叶片中的内源细胞分裂素含量下降。而通过细胞分裂素合成酶的基因转化，植物叶片中限速酶异戊烯基转移酶基因的表达能让植物合成大量的细胞分裂素并积累，能有效的延缓植物叶片的衰老【9】。
叶片衰老前大量形成的细胞分裂素改变了转异戊烯基转移酶基因植株内对生长发育至关重要的细胞分裂素/生长素平衡。实验证明, 利用异戊烯基转移酶基因转化植物以延缓叶片衰老,关键是选择合适的启动子。该启动子要能在叶片中表达,且是在叶片衰老时而非衰老前表达,同时该启动子要有自动调控能力, 防止异戊烯基转移酶基因过量表达。在上述转基因水稻植株中叶片衰老和光合功能衰退都缓慢,且不发生叶片发育异常现象,形态方面与野生型也无明显差异,根系发育完全,顶端优势得到保持【10】。
外施细胞分裂素处理离体叶片,能显著延缓叶片的衰老【11】；用细胞分裂素处理黄化叶片能促使其返青【12】。细胞分裂素在实践生产中已经得到了广泛的运用，如运用细胞分裂素保绿防衰、延长蔬菜贮藏时间等。不同类型的细胞分裂素延缓叶片衰老的效果不同，细胞分裂素的不同使用方法产生的效果也不同【9】。如对烟草而言，细胞分裂素延缓衰老的作用相对于其他植物激素效果最好,而外施细胞分裂素相对于其他使用方式效果最好。此外烟草叶片中各类型细胞分裂素的含量及变化也对烟草叶片的衰老有着明显的影响【13】。
受体是细胞表面或亚细胞组分中的一种生物大分子物质．可以识别并特异性地与有生物活性的化学信号分子结合，从而引发细胞内一系列生理生化反应，最终能使该细胞即靶细胞产生特定的效应。拟南芥有3个细胞分裂素受体：CRE1/WOL/AHK4、AHK2和AHK3【14】。而草莓中有4个细胞分裂素受体基因,分别是细胞分裂素受体基因2（包括FveHk2a和FveHk2b）、细胞分类素受体基因3（FveHK3）和细胞分裂素受体基因4（FveHK4）。

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