本实验以强耐寒‘墨丽’、‘旌旗’，一般耐寒‘桃の艳’、‘正风学士’，不耐寒‘赤尾旋风’、‘泉香万圣’六种秋菊为材料，从该六种秋菊中克隆抗寒转录因子秋菊ICE2，并对其进行荧光定量PCR分析，探讨秋菊ICE2在不同时间点不同品种中的表达水平变化。利用 PCR 技术获得秋菊 ICE2 全长的 cDNA 序列，并对该序列进行基本的物理化学性质预测，采用荧光定量 PCR 研究秋菊 ICE2 在不同时间点不同品种中的表达水平变化。cDNA 片段全长 1350 bp，分别编码450、451、450、450、452、450个氨基酸，分子量在48753.69-48925.94Da之间；根据等电点可以看出编码的氨基酸除了‘桃の艳’是弱碱性，其他均为酸性；6个品种ICE2基因翻译的蛋白均为疏水性蛋白；与拟南芥 AtICE2 序列比对表明，结果显示该蛋白同样含有NLS核定位区域、 bHLH 结构域和ACT domain，前两者与拟南芥AtICE2 蛋白具有较高的同源性，但ACT domain在秋菊中有多达12处改变，其中10处在6个品种中均有出现；荧光定量 PCR 结果表明，该基因在强耐寒、一般耐寒、不耐寒中均有表达，并随着时间点的变化温度的下降秋菊ICE2基因表达量增加，所以该基因的表达受低温胁迫诱导。从秋菊中克隆了抗寒基因秋菊 ICE2，荧光定量 PCR 分析表明其在秋菊适应低温胁迫的过程中发挥作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法1
1.1实验材料 2
1.2引物设计 3
1.3目的基因克隆与分析3
1.3.1秋菊ICE2的克隆与测序3
1.3.2 cDNA全长序列分析3
1.4秋菊ICE2基因在寒冷环境下的表达4
1.4.1荧光定量PCR程序4
1.4.2基因表达分析4
2结果与分析4
2.1 6个品种秋菊ICE2基因克隆4
2.2 6个品种秋菊ICE2基因编码的氨基酸序列理化性质分析及比较5
2.3 6个品种秋菊ICE2基因的氨基酸序列比对分析6
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4秋菊ICE2基因在不同秋菊品种中不同时间点的表达分析6
3讨论 7
致谢7
参考文献7
秋菊ICE2基因的克隆与表达特异性分析

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