摘要:菊花(Chrysanthemum morifolium)原产我国，是我国十大传统名花和世界四大切花之一，观赏和经济价值高，栽培与应用广泛。菊花为浅根、旱作花卉，喜通气、排水良好的砂质土壤，忌积涝。由于我国气候原因，菊花在栽培和园林应用中涝害危害严重，造成极大的损失。RAP2.12属于AP2/ERF家族转录因子成员，在拟南芥研究中发现对响应淹水和低氧胁迫具有重要作用。为研究菊花CmRAP2.12基因在淹水胁迫中的作用，本文以菊花品种‘南农雪峰’为试验材料，对其进行了CmRAP2.12基因克隆，淹水处理及CmRAP2.12基因表达模式分析，基因同源性分析，通过酵母验证了基因转录激活活性，同时通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统进行了基因亚细胞定位。结果表明：CmRAP2.12基因ORF全长980 bp，蛋白序列中含有一个高度保守的58个氨基酸的AP2结构域，属于ERF家族；对菊花品种‘南农雪峰’进行淹水处理6h和12后，与对照组相比CmRAP2.12基因表达量显著上调。系统发育进化树分析发现菊花CmRAP2.12与葡萄中VvRAP2.12基因和苹果中MdRAP2.12基因亲缘关系较近；菊花CmRAP2.12基因定位于细胞核中并且在酵母中无转录激活活性。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 2
Key words 3
第一章 文献综述 3
1 ERF基因的结构和功能 3
1.1 转录因子的定义和功能 3
1.2 ERF转录因子的特征 3
1.3 ERF在淹水胁迫中的作用 3
2 植物耐涝机制研究进展 4
2.1 涝害对植物的影响 4
2.1.1 涝害对植物水分代谢的影响 4
2.1.2 涝害对植物光合作用的影响 4
2.1.3 涝害对植物激素平衡的改变 4
2.2 植物对淹水胁迫的形态学适应 4
2.2.1 根系 4
2.2.2 通气组织 4
2.2.3 茎和叶片 4
2.3 植物对淹水胁迫的生理适应 5
第二章 CmRAP2.1
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2基因克隆､序列分析及表达特性 5
1 材料与方法 5
1.1 材料 5
1.2 实验方法 5
1.2.1 ‘南农雪峰’的淹水处理 5
1.2.2 RNA提取 5
1.2.3 第一链cDNA合成 6
1.2.4 PCR高保真 6
1.2.5 PCR产物回收纯化及连接转化 7
2 结果与分析 7
2.1 CmRAP2.12序列的同源性分析 7
2.2 CmRAP2.12淹水处理后表达模式分析 8
3 讨论 9
第三章 CmRAP2.12基因功能初步分析 9
1 材料与方法 9
1.1 材料 10
1.2 实验方法 10
1.2.1 CmRAP2.12亚细胞定位 11
1.2.2 CmRAP2.12转录活性的测定 11
2 结果与分析 13
2.1 CmRAP2.12亚细胞定位 13
2.2 CmRAP2.12转录活性的测定 13
3 讨论 14
致谢 14
参考文献 15
附录 15
菊花CmRAP2.12基因的克隆及功能验证

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