摘要:葡萄是赤霉素高度敏感性树种，赤霉素在葡萄花果发育过程中起着重要作用。本研究以‘藤稔’为试材，利用RT-PCR技术分析miR159及其靶基因GAMYB-like在葡萄花和果实发育不同时期的时空表达图谱及其应答赤霉素的模式。结果显示，miR159家族成员中只有miR159c在处理与对照花、果的不同时期均有表达，而miR159a/b仅在个别组织特定时期中有微弱表达，表明miR159c可能在葡萄中起着重要作用；从miR159c的表达图谱可知，其仅在花中有较高水平的表达；GAMYB-like基因表现出与miR159c相反的表达模式，这表明miR159c负调控了GAMYB-like的表达；同时，在花中也检测了GAMYB-like的靶基因LEAFY（开花相关基因）的表达，表明miR159c可能通过负调控GAMYB-like基因表达从而间接上调LEAFY基因表达。本研究为深入认识miR159及其靶基因 GAMYB-like在葡萄中功能提供了参考依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1.1.1实验材料 2
1．1．2 主要仪器设备 2
1．2 方法 2
1．2．1 总RNA的提取 2
1.2.1.1果实RNA的提取 3
1.2.1.2花的RNA的提取 3
1．2．2 RNA样品中DNA的消化 3
1．2．3 葡萄cDNA合成 4
1．2．4 引物设计 4
1．2．5 miR159与GAMYB基因的半定量RTPCR表达 5
2 结果与分析 5
2．1 RNA的完整性与纯度检测 5
2.1.1 检测RNA的完整性 5
2.1.2 RNA纯度检测 6
2．2 样品cDNA的浓度标定与稀释倍数确定 6
2. 3 葡萄miR159家族不同成员在处理与对照的花果发育过程中的时空表达分析 7
2.4 GAMYB基因的时空表达 7