本文通过逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR），分离得到了鲤鱼两种血清淀粉样蛋白A（Serum amyloid A, SAA）的cDNA序列。克隆结果显示，鲤鱼SAA1和SAA2开放阅读框长均为372bp，编码123个氨基酸组成的蛋白质，同源分析结果表明，SAA1和SAA2氨基酸序列的相似性为83.47%，均与同科的鲫鱼相似性最高，分别为93.50%和80.99%。系统进化分析表明，鲤鱼SAAs与不同纲动物的SAA之间的遗传距离与分类地位基本一致。通过构建SAAs-pET-32a(+)原核表达系统，在37℃，经0.1mM IPTG诱导表达6h后，成功地在大肠杆菌Transetta DE3中表达出目的蛋白。经过Ni柱纯化，超滤、浓缩之后获得了高纯度蛋白，BCA蛋白浓度测定结果为SAA1上清和沉淀的蛋白浓度分别为1.30mg/ml、0.27mg/ml，SAA2上清和沉淀的蛋白浓度分别为2.74mg/ml、0.45mg/ml。关键字鲤鱼；血清淀粉样蛋白A；序列分析；原核表达；蛋白纯化
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1实验材料2
1.1实验用鱼 2
1.2实验试剂 2
1.3实验引物2
2实验方法3
2.1 鲤鱼SAA基因cDNA序列的克隆3
2.1.1鲤鱼SAA基因编码区cDNA序列克隆3
2.1.2 DNA回收3
2.1.3 克隆3
2.1.4菌液PCR4
2.2鲤鱼SAA基因序列分析4
2.2.1鲤鱼SAA基因的cDNA、氨基酸序列分析4
2.2.2鲤鱼SAA基因的遗传进化分析4
2.3鲤鱼SAA基因的原核表达4
2.3.1鲤鱼SAA基因编码区的扩增4
2.3.2重组质粒的构建及鉴定4
2.3.3重组质粒的原核表达及鉴定5
2.4鲤鱼SAA基因的蛋白纯化5
2.4.1融合蛋白的纯化及鉴定5
2.4.2蛋白的超滤、浓缩5
2.4.3蛋白浓度测定6
3结果6
3.1鲤鱼SAA基因序列分析6
3.1.1鲤鱼SAAs基因的cDNA、氨基酸序列分析6
3.1.2遗传进化分析8
3.2鲤鱼SAA基因的原核表达9
3.2.1鲤鱼SAAs基因的信号肽分析10
3.2.2鲤鱼SAAs基因编码区的扩增10
3.2.3重组质粒SAAspET32a(+)的构建与鉴定10
3.2.4 重组质粒SAAspET32a(+)的原核表达11
3.3鲤鱼SAA基因的蛋白纯化11
3.3.1 pET32a(+)/SAAs融合蛋白的纯化11
3.3.2 BCA蛋白浓度测定12
4讨论13
4.1 鲤鱼SAAs基因的序列分析13
4.2 鲤鱼SAAs基因的遗传进化分析13
4.3 鲤鱼SAAs基因的原核表达14
致谢14
参考文献14


原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/scyz/64875.html