蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)是豆科生物学和基因组学研究的模式植物。WRKY转录因子作为一类序列特异的DNA结合转录因子为人们所发现，其能够在植物进行的多种生物学进程中起到重要的调控作用。WRP（WRKY Related Protein）是豆科植物中的一类WRKY相关蛋白，其序列结构与WRKY转录因子存在一定的相似，但又具有独特性。目前对WRP调控功能和作用机制的认识，特别是在豆科牧草上的研究还非常有限。基于此，本文研究了蒺藜苜蓿中的WRKY相关蛋白MtWRP1，初步分析其在蒺藜苜蓿中的功能。实验结果如下(1)蒺藜苜蓿同一分支不同发育时期的叶片中MtWRP1表达量不同，随叶龄增加稳步增长；(2)在蒺藜苜蓿根部接种根瘤菌一段时间后，与未接种对照植株相比，接种根瘤菌植株根系中MtWRP1的表达量增加；(3)获得了MtWRP1过表达转基因蒺藜苜蓿，筛选得到了转基因蒺藜苜蓿株系；(4) 筛选了蒺藜苜蓿Tnt1插入突变体，并得到了NF 15254和 NF 17592两种纯合株系。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
1 绪论1
1.1 豆科模式植物——蒺藜苜蓿2
1.2 WRKY转录因子2
1.3 WRKY相关蛋白WRP2
1.4 转基因技术在蒺藜苜蓿中的应用3
1.5 Tnt1插入突变体在蒺藜苜蓿中的应用3
1.6 本研究的目的和意义4
2 材料与方法4
2.1 试验材料及处理4
2.2 试剂与仪器 4
2.3 总RNA的提取及cDNA合成5
2.4 蒺藜苜蓿MtWRP1基因表达特性分析6
2.5 根瘤菌诱导MtWRP1基因表达特性分析7
2.6 转基因蒺藜苜蓿的鉴定7
2.7 Tnt1插入突变体的鉴定8
3 结果与分析9
3.1 MtWRP1基因在蒺藜苜蓿组织中的表达特性分析9
3.2 根瘤菌接种后蒺藜苜蓿MtWRP1的表达特性分析9
3.3 MtWRP1过表达转基因蒺藜苜蓿的鉴定11
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3.4 MtWRP1基因Tnt1插入突变体的鉴定12
4 讨论12
致谢13
参考文献13
附录A 引物序列信息15
附录B 培养基与试剂配方15
MtWRP1转基因蒺藜苜蓿的鉴定和基因功能研究

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