赤眼蜂是鳞翅目害虫较为重要的天敌，常用于生物防治且效果显著。在赤眼蜂体内存在着多种共生菌，其中，Wolbachia是调控赤眼蜂生殖的一类共生菌，有研究指出，Wolbachia会导致某些种类赤眼蜂产生孤雌生殖的现象。本次实验利用特异性引物对实验室内8种赤眼蜂的12个种群进行Wolbachia的扩增和检测，用通用引物对7个种群的赤眼蜂体内的共生菌进行扩增并对其多样性进行调查。结果显示，在螟黄赤眼蜂的山西品系、卷叶蛾赤眼蜂的河北品系和碧岭赤眼蜂的浙江品系中检测出了Wolbachia，但是感染率较低。在赤眼蜂体内共生菌多样性检测分析中发现，松毛虫赤眼蜂的吉林品系和螟黄赤眼蜂的山西品系体内共生菌丰富度较高；螟黄赤眼蜂的山西品系均匀度指数较高；螟黄赤眼蜂山西品系的香农-维纳多样性指数达到2.8以上，螟黄赤眼蜂山西品系和碧岭赤眼蜂的浙江品系的辛普森多样性指数达到0.91以上。研究赤眼蜂体内Wolbachia的感染情况和其体内微生物多样性，对如何高效利用赤眼蜂防治鳞翅目害虫具有一定的指导意义。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料和相关条件2
1.1.1供试蜂种2
1.1.2赤眼蜂DNA提取液配制3
1.1.3 PCR反应体系3
1.1.4凝胶电泳3
1.1.5微生物多样性检测3
1.2实验方法 4
1.2.1赤眼蜂体内Wolbachia的DNA的提取4
1.2.2 PCR反应4
1.2.3 PCR反应产物电泳检测5
2结果与分析5
2.1 赤眼蜂感染Wolbachia的结果分析5
2.1.1第一轮PCR反应检测5
2.1.2第二轮PCR反应检测5
2.1.3通过PCR检测8种赤眼蜂Wolbachia感染情况的分析5
2.2赤眼蜂体内微生物多样性的分析析6
2.2.1分析概况6
2.2.2数据分析6
2.2.3赤眼蜂体内感染Wolbachia情况6
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3讨论 7
致谢8
参考文献8
赤眼蜂感染Wolbachia情况及微生物多样性的调查与分析
引言
引言
赤眼蜂（Trichogramma）属膜翅目（Hymenoptera）赤眼蜂科（Trichogrammatidae）昆虫，是人们广泛应用的防治鳞翅目（Lepidoptera）害虫的一类卵寄生蜂。赤眼蜂将卵产入鳞翅目害虫的卵中，吸取寄主卵中营养，导致寄主卵无法孵化，这样便可以达到一定水平的生物防治的作用。赤眼蜂防治农田鳞翅目害虫的应用比较广泛，防治效果也较为显著，并且还有专门生产蜂卡的厂商。所以，赤眼蜂是一类较为理想的害虫天敌。
在赤眼蜂体内存在着多种共生菌。其中，Wolbachia就是一种广泛存在于各类节肢动物生殖器官的共生菌。Wolbachia于1924年由Hertig和 Wolbach在尖音库蚊（Culex pipiens）卵巢中首次发现[1]，并在1936年，Hertig为纪念合作者Wolbach，将这种微生物命名为Wolbachia pipientis[2]。1971年，Yen和Barr[3]在研究Culex pipiens L.时发现Wolbachia会影响到蚊虫的生殖，并指出未感染Wolbachia的雌虫与感染Wolbachia的雄虫交配，受精卵无法存活，不能产生后代，这种现象称为胞质不亲和 （Cytoplasmic Incompatibility, CI）。目前，Wolbachia影响昆虫的生殖的方式除了引起胞质不亲和（CI）以外，还有：造成孤雌生殖（Parthenogensis Induction, PI）、雌性化、雄性致死、增强雌性繁殖力和雄性生育力。Wolbachia通过其特殊的机制，影响着昆虫的生殖方式，同时也通过垂直传播的方式，使Wolbachia传递到下一代虫体中。其中，Wolbachia对赤眼蜂的生殖调控作用有两种：一是产雌孤雌生殖，二是增强雌性繁殖力[4]。项宇[5]在卷叶蛾赤眼蜂（Trichogramma cacoeciae）中检测出了Wolbachia的存在，通过高温消除Wolbachia之后发现，经过高温培养的卷叶蛾赤眼蜂没有出现产雌孤雌生殖的现象，而未处理的对照组则会继续出现该现象，推论Wolbachia是导致卷叶蛾赤眼蜂的孤雌生殖现象的原因。
Wolbachia感染赤眼蜂情况的研究也受到了广大研究者的注意。根据现有报道，钟敏[6，7]在松毛虫赤眼蜂（T. dendrolimi）的北京品系、松毛虫赤眼蜂的广东品系、螟黄赤眼蜂（T. chilonis）的北京品系、螟黄赤眼蜂的广东品系、玉米螟赤眼蜂（T. ostriniae）的北京品系、玉米螟赤眼蜂的广东品系、食胚赤眼蜂（T. embryophagum）的德国品系、广赤眼蜂（T. evanescens）的吉林品系中检测Wolbachia的存在。钟敏针对Wolbachia的不同品系，参考Zhou et al.通过wsp基因建立的Wolbachia分类体系，对这几种赤眼蜂均进行特定类群的wsp特异性引物进行扩增检测。结果显示，在松毛虫赤眼蜂的北京品系、螟黄赤眼蜂的北京品系、玉米螟赤眼蜂的北京品系、食胚赤眼蜂的德国品系中检测出了B类群的Wolbachia；而在广赤眼蜂的吉林品系中检测出了A类群的Wolbachia。 钟敏在接下来的研究中发现，利用PCRRFLP的技术手段，在广赤眼蜂的吉林品系中检测出了Wolbachia的超感染现象；在玉米螟赤眼蜂的北京品系中检测发现有3种Wolbachia的感染。刘宏岳等[10]对玉米螟赤眼蜂感染Wolbachia进行了研究，在我国主要玉米产区（北京、河北、山东、陕西、河南、江苏、湖南、贵州、云南和广东），选取了14个地区对当地的玉米螟赤眼蜂进行采样调查。结果发现，在14个地点采样得到的玉米螟赤眼蜂中，感染率为100%。针对这14个样点采样得到的玉米螟赤眼蜂进行Wolbachia组（类群）的检测，结果显示，有4个样点的玉米螟赤眼蜂只感染B组Wolbachia，5个样点的赤眼蜂只感染A组Wolbachia，5个样点的玉米螟赤眼蜂出现了超感染现象。

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