南方根结线虫（Meloidogyne incognita）是一种重要的植物内寄生线虫，每年都给我国农业生产带来严重的产量损失。南方根结线虫分泌的效应蛋白在侵染植物过程中发挥着十分重要的作用，Mi-V75是南方根结线虫分泌的一种类毒液过敏源效应蛋白，本文在实验室前期已发现南方根结线虫效应蛋白Mi-V75与番茄中的一种E3泛素连接酶RNF14部分片段在酵母中发生互作的研究基础上，通过酵母双杂技术验证Mi-V75与RNF14全长的互作及影响互作的靶标蛋白关键结构域、并利用共定位分析和双分子荧光互补技术进一步在植物细胞中验证其互作。研究结果证实Mi-V75与RNF14全长能够激活酵母报告基因表达并在四缺培养基上正常生长且RNF14的IBR2C结构域是RNF14与Mi-V75在酵母中互作的关键结构域，激光共聚焦观察显示Mi-V75与RNF14在烟草细胞中共定位，BiFC也证实了两者的互作。研究结果增加了我们对线虫与植物互作机制的理解，同时为今后开发新的线虫防治策略打下基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试材料 2
1.2 RNF14与MiV75酵母互作验证及互作关键结构域筛选2
1.2.1 酵母表达载体构建2
1.2.2 酵母感受态制备与转化2
1.3 植物表达载体构建3
1.4 农杆菌转化3
1.5 农杆菌瞬时表达及定位观察3
1.6 BiFC检测MiV75与RNF14在烟草细胞中的互作3
2 结果与分析3
2.1 酵母双杂验证MiV75与RNF14的互作及筛选互作关键结构域4
2.1.1 酵母双杂验证MiV75与RNF14全长的互作4
2.1.2 酵母双杂筛选MiV75与RNF14互作关键结构域5
2.2 植物表达载体构建6
2.3 共定位观察MiV75与RNF14在烟草细胞中的互作6
2.4 BiFC检测MiV75与RNF14在烟草细胞中的互作7
3 讨论 7
致谢8 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 

参考文献8
图1 含RNF14全长基因的AD载体的构建4
图2 MiV75和RNF14全长互作验证4
图3 含RNF14不同结构域的AD载体的构建5
图4 MiV75和RNF14不同结构域互作验证5
图5 植物表达载体6
图6 MiV75和RNF14在烟草叶片中的共定位6
图7 BiFC验证MiV75和RNF14在烟草细胞中的互作7
表1 本文所涉及的引物名称及序列2
南方根结线虫MiV75与番茄RNF14互作验证

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