本实验选取两种植物激素MeJA(浓度设置为10、25、50、100、200μM)和SA(浓度设置为50、100、200μM)诱导处理、腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae )取食（1-4d）糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）菌丝体，采用HS-SPME-GC-MS/MS法分析其代谢谱变化，研究糙皮侧耳在腐食酪螨取食和植物激素处理下菌丝体挥发性物质的组成和变化规律。实验结果表明，糙皮侧耳在MeJA、SA和螨虫取食下的代谢谱均有显著差异，但都产生了A-姜黄烯，经处理过后对照中含量较高的3,5-二甲基-3羟基-2-己酮的峰值下降迅速。在不同的处理下，糙皮侧耳中的萜类尤其是倍半萜物质有增多的现象，尤其是在腐食酪螨取食第一天、200μM的MeJA、50μM的SA处理下增多最为明显，证实植物激素SA和MeJA能够诱导糙皮侧耳的倍半萜类物质代谢积累，为糙皮侧耳的挥发性物质尤其是萜类化合物的合成和生产提供很好的研究方法积累和技术支撑。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 12
1 糙皮侧耳的形态特征 2
2 材料与方法 2
2.1 材料 2
2.1.1 供试寄主 2
2.1.2供试螨虫 2
2.1.3试剂 3
2.2 方法 3
2.2.1菌丝培养 3
2.2.2诱导方法 3
2.2.3分析方法 3
3 结果与分析 3
3.1 糙皮侧耳正常条件下挥发物质的代谢 34
3.2 MeJA对糙皮侧耳挥发物质的代谢的影响 5
3.2.110μM MeJA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 56
3.2.2 25μM MeJA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 68
3.2.3 50μM MeJA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 810
3.2.4 100μM MeJA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 1011
3.2.5 200μM MeJA处理后的菌丝体HSSPM *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
EGCMC分析 1213
3.3 SA对糙皮侧耳挥发物质的代谢的影响 13
3.3.1 50μM SA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 1415
3.3.2 100μM SA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 1517
3.3.3 200μM SA处理后的菌丝体HSSPMEGCMC分析 1719
3.4腐食酪螨取食对糙皮侧耳挥发物质代谢的影响 19
3.4.1 腐食酪螨取食糙皮侧耳第一天 1921
3.4.2 腐食酪螨取食糙皮侧耳第二天 2122
3.4.3 腐食酪螨取食糙皮侧耳第三天 2223
3.4.4 腐食酪螨取食糙皮侧耳第四天 2425
4 讨论 2526
致谢 26
参考文献 27
腐食酪螨取食和植物激素
对糙皮侧耳挥发性代谢物质的影响
引言
糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）又名平菇，肉质鲜美并且有一定的药用价值，是世界上四大著名的栽培食用菌之一。其含能产生结构多样、新颖、生物活性广泛的次级代谢产物[1]，如萜类、醇类物质等，具有抗菌、抗支原体、抗炎、抗肿瘤等生物活性，可被应用在杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、杀病毒剂及植物生长调节等领域，因此成为新的药物和先导化合物的重要资源[2]。
经研究发现，环境因子能显著影响糙皮侧耳挥发性代谢物质的含量。侵害食用菌的害虫种类繁多，近年来，随着食用菌工厂化栽培，食用菌害螨的危害也越来越严重，其中腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae )是食用菌生产中为害较重的螨类，直接影响食用菌的产量和品质[3]。研究表明，植物激素如MeJA通过诱导植物次生代谢物含量的增加，主要是以信号分子的形式参与到植物次生代谢过程中，调控相关关键酶基因的表达，影响关键酶活性，从而对次生代谢物如萜类化合物的合成进行调控[4]。据实验证明，不同浓度的MeJA对灵芝三萜合成的影响具有显著差异[5]。同时，当植物受到昆虫侵食后，昆虫唾液中的一些物质可诱导次级代谢挥发物的产生[6]。
真菌如糙皮侧耳的次级代谢产物具有可再生性，通过菌种诱变、培养条件改变以及代谢调控等手段可以优化目标代谢产物；而且其次级代谢产物结构往往新颖且生物活性独特，是最有希望的先导化合物来源，在现代新药研发中发挥着重要作用[7][8][9][10]。目前对糙皮侧耳的挥发性物质研究较少，因此本实验主要是研究糙皮侧耳在腐食酪螨取食和植物激素处理下挥发性物质的变化，为糙皮侧耳的挥发性物质尤其是萜类化合物的合成和生产提供科学依据。
1 糙皮侧耳的形态特征
糙皮侧耳又名平菇，属于四极性异宗结合的食用菌，其生活史与许多高等担子菌相似，由子实体成熟产生担孢子。担孢子从成熟的子实体菌褶里弹射出来，遇到适宜的环境长出芽管，初期多核，很快形成隔膜，每个细胞一个较平坦有序而浓密。春季或秋季生于阔叶树腐木或伐桩，多见于杨树腐木或伐桩，东北地区广泛分布。
人工栽培的菌丝在琼脂培养基上洁白浓密，子实体中等至大型，扇形簇生，菌盖直径513cm，白色至青灰色，有纤毛，水浸状，扁半球形，后平展有后沿，菌肉厚白色，菌褶白色，稍密至稍稀在柄上交织，在菌柄上交织成网络。菌柄白色侧生，长13cm，粗12cm，基部常有白色绒毛。孢子印白色，在显微镜下，孢子无色光滑，近圆柱形。担子细长棒状，具四个担子小梗。菌髓组织胶质排列，由直径510μm的薄壁至厚壁菌丝构成。平菇中蛋白质含量为18.5%37.82%，总糖含量为26.30%44.40%，含有多种微量元素及维生素。
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1供试寄主：
供试寄主糙皮侧耳，本试验分析所用的是菌丝体。菌丝的培养和保存：在实验前，将不同供试菌种接种于PDA培养基（培养皿直径d=70 mm）中，每个品种接种10个平板，封口膜封口后25℃下避光培养，待菌丝长满平板后备用，4℃冰箱保存。
2.1.2 供试螨虫：
本实验选用的供试螨虫为腐食酪螨，其特征为体卵白色圆形，体长0.510.7mm，宽0.270.29mm，体表光滑有光泽，口器整状，4对足，各足财节末端有发达的匙状爪，体上具很多光滑的长刚毛，体背生1横沟，把身体分成前、后两部分，4对背毛不等长。
供试腐食酪螨于2012年采自江苏省徐州市毛木耳上，置于人工气候箱（SPX2501，上海博讯实业有限公司）内用2 ml离心管饲养，脱脂棉封口，以毛木耳原种大量饲养获得生育期一致的所需试虫，温湿度设定为25±0.5℃、85% RH。

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