番茄斑萎病毒 (Tomato spotted wilt virus, TSWV) 是布尼亚病毒科 (Bunyaviridae) 番茄斑萎病毒属 (Tospovirus) 的代表种。该病毒是农业生产中重要的植物病毒之一，在世界范围内引起极严重的经济损失。目前比较有效的防控方法是培育和推广抗性品种。从秘鲁番茄 (Lycopersicon peruvianum Mill.) 克隆到的的Sw-5b基因编码一个 CC-NB-LRR 类型的免疫受体蛋白，对包括TSWV在内的多种番茄斑萎病毒属病毒表现广谱抗性。MAPK级联途径是植物的一种保守的细胞信号传导通路，在植物遭受外界胁迫时被激活。为了探索免疫受体蛋白Sw-5b的抗性机制，所在实验室用免疫共沉淀的方法筛选与之互作的蛋白，得到了本氏烟（Nicotiana benthamiana）的MPKKK7蛋白。为进一步确定Sw-5b与NbMPKKK7蛋白之间的互作关系，本课题采用酵母双杂交、GST-pull down两种方法进行对二者的互作进行验证。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
1实验材料与试剂2
1.1实验材料 2
1.1.1表达载体2
1.1.2引物3
1.1.3烟草3
1.1.4菌株表达载体3
1.2实验试剂 3
2实验方法3
2.1载体构建3
2.1.1 PCR扩增3
2.1.2酶切3
2.1.3连接4
2.1.4转化大肠杆菌DH5α4
2.1.5 提取质粒4
2．2 酵母双杂交实验5
2．2．1 培养基5
2．2．2 共转化方法5
2．2．3 筛选阳性克隆5
2．3 GSTpull down实验5
2．3．1农杆菌GV3101浸润本氏烟5
2.3.1.1通过电击转化载体进农杆5
2.3.1.2处理农杆菌5
2.3.1.3农杆菌浸润本氏烟6
2．3．2提取植物蛋白6 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 

2．3．3进行GSTpull down实验6
3结果与分析 6
3.1载体构建 6
3.2酵母双杂交实验 7
3.3 GSTpull down实验 8
4讨论 9
致谢9
参考文献10
图316
图328
图339
免疫受体蛋白Sw5b与本氏烟MPKKK7的互作研究

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