红色荧光蛋白mruby2的优化表达【字数：5795】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 载体和细胞2
1.1.2 主要试剂2
1.1.3 主要仪器2
1.2方法 2
1.2.1荧光蛋白质表达克隆pBMR(pRSETB/mRuby2)的构建2
1.2.2两个培养温度、三种诱导表达培养方法2
1.2.3诱导培养后的低温处理3
1.2.4红色荧光蛋白mRuby2波峰值的确定3
1.2.5数据分析3
2结果与分析3
2.1重组表达载体的构建3
2.2红色荧光蛋白mRuby2光化学特性的初步测定分析3
2.3三种接种方法荧光强度比较4
2. 3. 1激发和发射波谱扫描4
2. 3. 2单点荧光强度4
2.4 37℃下不同接种培养方式单点荧光强度统计分析5
2. 4. 1不同接种培养方式单点荧光强度方差分析5
2. 4. 2图表5
3 讨论 6
致谢7
参考文献7
红色荧光蛋白mRuby2的优化表达 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072#
引言
表4单点荧光强度不同冰箱保存时间Duncan氏新得极差法多重比较（α=0.05）
时间（天）
N
子集
1
2
3
4
5
0
12
2663.4833
1
12
3460.0333
4
12
4040.8333
6
12
4781.6667
8
12
6109.1667
Sig.
1.000
1.000
1.000
1.000
1.000
结果表明不同冰箱保存时间间差异皆显著。
2. 4. 2图表
用不同接种方法的荧光强度平均数绘制条形图如下，可见它们的差异情况。
图3 三种接种方法的荧光强度平均数
同样地，用不同的冰箱保存时间的荧光强度平均数绘制条形图如下，可见荧光强度随着时间增加的情况。
图4 不同冰箱保存时间对荧光强度的影响
3 讨论
荧光蛋白质的表达效果可以从通过直接进行荧光测定而得知，方便影响重组蛋白质表达的因素研究。本实验结果表明，红色荧光蛋白mRuby2不论是在37℃下还是在24℃下皆能表达并正确折叠发射荧光。在比较的时间范围内它们的荧光强度会随着冰箱的保存时间的增加而增加。但在实际重组蛋白质的提取纯化中，一般是先收集细胞再破细胞后提取纯化蛋白质。所以实际合适的冰箱保存时间需考虑细胞的完整性。在上述实验中，我们注意到随着冰箱保存时间的延长，在荧光强度增加的同时细胞解体的比例也会增加，尤其在冰箱保存四、五天后。保存8天后，表达培养物由于细胞解体而OD600下降明显。所以，综合考虑的话，冰箱保存的时间不宜超过四、五天。
红色荧光蛋白质RFPs (DsRed, TagRFP, and tdTomato)本来作为二聚体或四聚体从珊瑚虫（Anthozoa corals）分离出来[5]。mRuby2来自mRuby，mRuby是eqFP611 (Kredel et al., 2009，来自奶嘴海葵Entacmaea quadricolor)的单亚基突变体。mRFP1是DsRed的单亚基突变体(Campbell et al., 2002)。mCherry是DsRed 荧光蛋白质的单亚基突变体[3]。mRuby2是现今使用的最广泛的红色荧光蛋白之一，其发射波长较长，灵敏度高，为基于GFP的体内研究提供了一个很好的互补工具。其应用领域越来越广，它与GFP相结合，为分子生物学和细胞生物学的相关领域的研究提供了一个新的、快捷的检测手段。mRuby2是现今使用的最广泛的红色荧光蛋白之一，研究其表达的最适条件和测定红色荧光蛋白mRuby2的相关参数设置，可为一般性的重组蛋白质优化表达提供参考。有助于我们搞清楚影响重组蛋白质表达的细胞类型因素和细胞内的环境（pH、溶液、离子强度和氧化还原的条件）因素，研究对重组蛋白质表达水平、折叠和成熟等影响的各种因素[9]。对荧光蛋白质的光谱、亮度、光稳定性、热与pH的稳定性和多聚化的倾向等性能进行研究[6]。为一般性的蛋白质基因表达与调控、分子标记和蛋白相互作用等研究提供理想的工具 [1] 。
致谢
同时，我还要感谢我的父母。焉得艾草，言树之心，养育之恩，无以为报，感谢你们在我成长的道路上一直默默的陪伴着，守护着我，给了我最好的学习生活环境，在我遇到困难挫折时耐心的开导我，鼓励我。在南京求学4年，我们聚少离多，我常为不能陪在父母身边而感到难过，你们的健康快乐永远是我最大的心愿。
最后，我还要感谢与我朝夕相处了四年的室友——戴佳容、马丽娟、王晓娜、付阳、刘昕，感谢可以与你们一起成长，一起学习，一起努力；感谢你们对我的包容、支持、理解；感谢我们曾一起携手走过的大学四年，谢谢你们！
参考文献：
原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/zwbh/560687.html
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