反刍动物对日粮的消化吸收效率会因为瘤胃微生物种类数量改变的原因而产生变化，因此改变日粮组成一定会对反刍动物瘤胃微生物的种类和数量变化产生影响，而此种变化又必然影响饲料的消化利用率。本项目拟通过采集不同日粮饲养条件下的的羔羊瘤胃，提取DNA，通过PCR扩增、纯化illumima测序，然后分析瘤胃微生物的组成及数量和羔羊在不同日粮饲养条件下瘤胃微生物组成和数量的差异，以期得到日粮中添加紫花苜蓿颗粒对山羊羔羊瘤胃微生物多样性的影响，为通过改变瘤胃微生物的区系组成来改善反刍动物对饲草的利用效率提供理论依据。经研究发现，在山羊山羊发育日粮中添加饲草颗粒可以促进其瘤胃微生物的生长繁殖，从而通过提高草牧业生产效率来获取更大的经济效益。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1.1瘤胃微生物多样性研究的重要意义1
1.2国内外研究现状2
正文2
1材料与方法2
1.1试验材料 2
1.1.1瘤胃样品材料获得方法 2
1.1.2主要试验仪器3
1.1.3主要试验试剂3
1.2试验方法 3
1.2.1技术路线4
1.2.2试验方案4
2结果与分析6
2.1微生物物种组成分析6
2.2微生物多样性分析7
2.2.1 Alpha多样性分析7
2.2.2 Beta多样性分析8
3讨论9
3.1实验中的注意事项9
3.1.1 取样中的注意事项9
3.1.1 DNA提取中的注意事项9
3.1.1 DNA浓度检测中的注意事项9
3.1.1 PCR过程中的注意事项9
3．2 有关试验的讨论10
致谢10
参考文献11
不同日粮对山羊羔羊瘤胃微生物多样性的影响
引言
引言
1．1 瘤胃微生物多样性研究的重要意义
人畜争粮问题是我国畜牧业长期可持续健康发展的伟大历史进程中不 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
可回避的关键问题。反刍动物在保障畜产品安全及缓解粮食压力中起到了极为重要的作用，这是因为它们具有极其完备的自我调控功能和与众不同的消化代谢特性。因此，竭力保障反刍动物健康生长的方向，就是未来我国现代畜牧业结构调整的主导发展方向。
作为反刍动物日粮中占比最大且不可或缺的一部分，饲草在日粮中起着提供能量，调节采食量和维持反刍动物正常反刍的重要作用。不仅如此，在反刍动物的日粮中添加饲草还能在维持其能量需求之外为反刍动物提供诸如矿物质元素，维生素等必需营养素。饲草中的粗纤维能通过刺激反刍动物的瘤胃壁加快正常反刍的进行并促进瘤胃蠕动。除此之外，与精料相比，饲草具有生长时间长，收获率高，能量产值高的特点，因此，它能为反刍动物提供大量价格低廉且种类丰富的营养素，为以降低日粮成本的方式缓减“人畜争粮”矛盾提供了出路。
高品质的饲草能提高反刍动物的采食量并对瘤胃内环境进行优化，提高瘤胃消化率，补充日粮中不足的营养素，最后达到改善反刍动物生产效率的效果进而提高产值，为牧户增加经济效益。反刍动物瘤胃内的微生物会从饲料中获取营养用来进行自身的生长和繁殖，并同时促进饲料被动物消化系统消化吸收。
研究在反刍动物日粮中添加饲草对瘤胃微生物的影响有利于探究瘤胃微生物在饲草添加条件下的变化，为进一步通过调节瘤胃微生物来提高饲料利用率和促进饲草高效利用提供理论依据，同时可以通过提高动物生产性能来取得更大的经济效益，具有生产实践意义，应用前景光明。
1．2 国内外研究现状
反刍动物的瘤胃提供了厌氧环境，使其中的细菌和其他微生物能够有效的降解纤维，也使得反刍动物能在某种程度上消化和利用纤维素和半纤维素这些物质，将这些纤维成分转变成自身可利用的能量，但是纤维素中的木质素不能被瘤胃内微生物所降解，因而也就不能被反刍动物消化利用。[3]正应如此，了解并合理利用碳水化合物的独特构造以及它与蛋白质、木质素之间的复杂关系可以极大的提高反刍动物日粮的营养价值。
反刍动物瘤胃中的微生物种类及数量可以直接影响瘤胃对日粮中各种营养物质的消化利用效率。因此，反刍动物和其饲用所需日粮可以通过瘤胃微生物（包括细菌、真菌、原虫）紧密的联系起来。除此之外，还有一个重要的原因是反刍动物营养物质代谢方面尤其是粗饲料利用方面会受到瘤胃微生物区系的重大影响。因此对维持反刍动物的正常营养状态及良好的生理状况和外来病害防御功能来说，添加日粮成分的影响研究起着不可估量的作用。
在正常饲养条件下，山羊绵羊瘤胃中栖息的微生物包括细菌(超过200种)、原虫(超过25属)、真菌(超过5个属)和古菌,噬菌体颗粒数可达107109个/ml，细菌、真菌、原虫和少量噬菌体组成了山羊绵羊的主要瘤胃微生物区系。[2]所以会有一个复杂而完善的生态系统在反刍动物宿主与其体内微生物种群之间和种群中的各类不同微生物之间形成，这种复杂的生态系统将会稳定的把微生物种群间及微生物与宿主的相互关系协调至一种微妙的和谐状态。
有研究表明，若能补饲少量的青绿饲草于以秸秆等低质饲料为基础日粮的反刍动物饲喂方式中，则可以对反刍动物瘤胃内的菌群尤其是纤维分解菌的快速繁殖起到有效的促进作用，并能因此向有利于提高消化率的方向改善瘤胃内环境，还将因为更多的纤维分解菌迅速在秸秆碎片上扩展而起到促进纤维物质消化的作用——即起到“接种”作用，从而有效的增强秸秆类饲草在反刍动物日粮中的利用率，为通过反刍动物生产性能的提高来达到科学饲养作出贡献。[1]另有研究表明，反刍动物消化系统内的原虫数量可以通过改良动物瘤胃内的有益微生物区系来控制。除此之外，改良反刍动物瘤胃微生物区系还可以通过提高反刍动物对低质粗饲料的消化率和利用率来增加微生物蛋白的产量，促使引发日粮的正组合效应。
补加饲草在反刍动物的蛋白质饲料中可使蛋白质饲料的消化率提高，同时对反刍动物的瘤胃健康产生有利作用。Uden等(1984)认为若想对粗饲料细胞壁成分的消化产生正效应则草食家畜的日粮精料水平不能超过30%。Tyrrel,H.F研究认为日粮中的粗料营养价值会在家畜饲养水平高时下降，此时如果在饲草中补饲淀粉类精料或可溶性碳水化合物将产生负组合效应[5]。同时部分研究表明，随日粮中精料含量和快速水解碳水化合物的数量增加，粗料中纤维类成分在瘤胃内的消化率和流通速率会大幅下降，假如采取提高瘤胃内pH值的方法之后仍旧不能改善纤维消化率，则将这种导致纤维消化率下降的负效应称为“碳水化合物效应”(或称底物竞争)。

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