本研究应用SSR分子标记技术分析了66份狗牙根种质资源的之间的亲缘关系及其遗传多样性。用14对SSR引物进行遗传多样性的分析，共产生44条清晰条带，多态性条带共计36条，多态性位点比率为76.21％。通过UPGMA聚类分析可以将66份供试材料分为3大类群。Ⅰ组包括28个品种,包括2份中国狗牙根，18份美国狗牙根和8份澳大利亚的狗牙根; Ⅱ组包括1个非洲狗牙根品种和36个澳大利亚品种。Ⅲ组只包括2个澳大利亚品种。同时在对根状茎的统计分析中，发现澳大利亚狗牙根大部分具有根状茎，而其他地区狗牙根均无地下茎。本实验结果表明狗牙根存在丰富的遗传变异并且聚类结果及其是否有根状茎与生态地理环境有一定的关联。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2方法 3
1.2.1基因组DNA的提取3
1.2.2ESTSSR分析3
1.2.3数据处理3
2结果与分析4
2.1 ESTSSR 分子标记遗传多样性分析 4
2.2聚类结果分析 5
2.3不同来源地狗牙根种质资源根状茎的统计及分析 6
3讨论8
致谢9
参考文献9
图1 66份狗牙根的UPGMA 聚类树状图5
图2 66份狗牙根主成分三维散点图 6
表1 14对引物2
表2 shannon指数和期望杂合度 4
表3各品系地下根状茎有无及丰富度7附表 66份狗牙根材料9
利用SSR分析66份狗牙根种植资源的遗传多样性
引言
狗牙根（Cynodondactylon (L.) Pers.）属于暖季型的禾本科植物，别名有绊根草、铁线草，江苏一带亦有天堂草的说法。因其具有植株低矮、根状茎和匍匐茎，生长速度快，耐热，抗旱力强，较耐践踏等优良特性，经常应用于南方地区的草坪建植，其在生态修复和水土保持上也有出色的表现。同时，狗牙根也有较好的适口性与繁殖快的特点，可以用做牧草。[1]
在我国 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
偏北方地区，狗牙根因其耐寒性差，往往无法越冬[2]，这也是暖季型禾本科草坪草的通病。植物根状茎是生长在地下的一种粗壮、肉质匍匐茎，在多年生禾草中，根状茎是重要的糖类、营养及水分存储器官[3]。同时研究表明，地下根状茎对植物的生长发育及抗逆性均具有积极的意义[4]，狗牙根地下根状茎的生长有利于提高植物的抗旱性及抗寒性。所以，培育出具有根状茎的狗牙根品种具有重要的实践意义。
筛选优异性状是培育新品种必要条件之一，也是开展新品种选育的重要基础工作。因DNA分子标记所显示的遗传多样性可直接反映物种基因组DNA的差异，现已被广泛使用[5]。ESTSSR作为其中最重要的分子标记之一，其简单有效，具有可以使基因标记与标记性状有“完美”的关联、开发成本低、通用性强等优点[6]，已广泛应用于主要粮食作物及经济作物分子辅助育种实践中。
周秦等用SSR分子标记技术对南瓜种质的遗传的多样性进行分析[7]。赵欣欣等人利用SSR分子标记辅助鉴定5个多花黑麦草骨干品种为亲本创制的杂种后代真实性的同时对亲本与杂种后代主要表型进行了比较[8]。张延辉等采用新疆各地和部分引自国外的品种、利用SSR分子标记进行遗传多样性研究，结果表明聚类结果与地理来源有一定的相关性[9]。这些研究都为本实验提供了理论依据和实验基础。
本研究使用ESTSSR 分子标记对66份不同地域的狗牙根品种进行遗传多样性分析，通过分析来自澳大利亚根状茎型群体自交及杂交后代遗传多样性，统计地下根状茎的表型，初步分析不同分布地区狗牙根的地下根状茎表型差异、遗传背景、变异水平及分布特点等，为多年生狗牙根种质资源的评估及耐逆新品种的选育奠定一定的基础。
1 材料与方法
1．1 材料
供试材料为大学草业科学购买的66份狗牙根资源（见附表）。包括44份澳大利亚狗牙根、9份杂交狗牙根和12份普通狗牙根。
1．2 实验方法
1.2.1基因组DNA的提取：
从每个盆栽中随机选取剪取新萌生的顶端嫩叶，试剂盒法提取基因组总DNA。
1.2.2 ESTSSR分析：
将引物分为两类：MP1（3、8、35B、58、63和72）和MP2（17、56、69、74、76、79、87、88和91）。SSR的14对引物如下。（表1）。扩增反应体系为20μL：2×PCRmix 10μL，DNA模板1μL，正反向引物各0.5μL，ddH2O 8μL。MP1 PCR循环过程为：95℃预变性15min、94℃变性30s、58℃退火90s、72℃延伸90s，30个循环；72℃延伸20min；4℃保存。MP2 PCR循环过程为：95℃预变性15min、94℃变性30s、62℃退火90s、72℃延伸60s，27个循环；60℃延伸30min。
SDSPAGE凝胶体系及染色：
分离胶的成分如下：去离子水 3.3ml，30%丙烯酰胺溶液4ml，浓缩的Buffer 2.5ml，10%SDS 0.1ml，10%过硫酸铵（AP）0.1ml，N,N,N′四甲基乙四胺（TEMED）20μL。总体系10ml。浓缩胶（5%）的配比如下：去离子水3.44ml，30%丙烯酰胺溶液0.82ml，Buffer 0.63ml，10%SDS 0.05ml，10%过硫酸铵（AP）0.05ml，N,N,N′四甲基乙四胺（TEMED）5μL。总体系5ml。
SDSPAGE电泳：取3μL基因组DNA进行电泳。电泳结束后，取下胶板。然后将凝胶从的玻璃板中取出，用蒸馏水漂洗2次，将凝胶转入1g/L硝酸银溶液中，轻摇612min进行银染。
凝胶用蒸馏水漂洗1次后，转入显色液中（6.0g NaOH、5ml甲醛定容至400ml）边遥边观察，直至条带清晰。
表1 SSR的14对引物
Table 1 Fourteen primer pairs
Marker
Primer Sequence (5′–3′)
Repeat
Size (bp)
Accession No.

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/cykx/562310.html