[免费论文]阿西美辛缓释微囊的处方及工艺优化
%,包封率为73.57%,载药量23.54%,24h累积释放度93.61%.结论：所制备的阿西美辛微囊工艺简单.可靠,具有缓释效果.关键字：阿西美辛；微囊；制备工艺；体外释放；Abstract:Objective:Tostudythepreparationtechnologyofacemetacinmicrocapsules,andtheirqualityevalution.Methods:Sodiumalginateandchitosanwereusedascapsulematerialsandtheacemetacinmicrocapsuleswerepreparedbyamechanicalemulsificationmethod,Itsappearance.particlesize.encapsulationefficiency.drugloadingandreleasedegreeinvitrowerestudied.Results:Thedosageofsodiumalginateandchitosanwere3%respectively,thepreparedmicrocapsulessphericalwithsmoothsurface,thesizeofuniform,andtheparticlesizedistributionwas76.40%in6070μm,theaverageencapsulationefficacywas73.57%,theaveragedrugloadingwas23.54%,andtheaccumulatedreleaseamountis93.61%in24h.Conclusion:Toprepareacemetacinmicrocapsulesissimpleandreliable,microcapsulescouldprovidesomecontrolled-releaseeffect.Keyword:Acemetacin;Microcapsule;Preparationtechnology;Invitrorelease;阿西美辛(Acemetacin)是吲哚美辛的酯类化合物,酯化后抗炎效果和耐受性得到提高,并能明显减轻吲哚美辛所致的胃肠道不良反应,临床上主要用于类风湿性关节炎骨关节炎.软组织损伤.急性痛风.术后疼痛的治疗[1].但阿西美辛难溶于水,片剂或胶囊剂生物利用度小,且口服后个体差异大,限制了药效发挥和临床应用[2].微囊是近年来发展起来的新型制剂,难溶性药物经微囊化,粒径减小,分散度升高,表面积增大,根据Noyes-Whit-eney方程,其溶出速率也会增加,从而改善药物吸收,提高生物利用度[3,4].本实验以海藻酸钠一壳聚糖机械乳化法制备阿西美辛缓释微囊,对其处方及工艺进行优化,并根据其包封率和载药量.体外释放度.形态及粒径分布等对微囊进行质量评价.1.材料1.1.材料：阿西美辛标准品(批号：100621-200803,我国生物制品检定所);阿西美辛原料(石家庄制药一厂,批号：20100523);阿西美辛胶囊(30mg/粒,广东华卫药业有限公司);壳聚糖(山东潍坊达成生物工程有限公司,批号20141017);海藻酸钠(Sigma公司);无水氯化钙(药用级,上海国药公司,批号20140913);Span-60(成都市科龙化工试剂厂,批号20150524).1.2.仪器：JA-2003电子天平(上海天平仪器厂);SC-15型恒温水浴槽(上海实验仪器厂);日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AT);QM-1SP型行星式球磨机(南京大学仪器厂);真空干燥箱(上海特成机械设备有限公司);智能溶出度测定仪(天津大学无线电厂);S-3000N扫描电子显微镜(日本日立公司).2.方法与结果2.1.阿西美辛含量测定：采用高效液相色谱法测定微囊中阿西美辛含量[5].2.1.1.色谱条件：色谱柱为C18柱(大连依利特,250mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇-醋酸盐缓冲液(pH6)=65:35;检测波长：319nm:柱温：25℃；流速：0.6mL/min;进样量；20μL.2.1.2.对照品溶液的制备：精密称定阿西美辛标准品50mg至50mL量瓶中,加甲醇适量超声溶解,流动相稀释至50mL,摇匀,备用.2.1.3.供试品溶液的制备：称取阿西美辛微囊适量,研细混匀.根据载药量精密称取粉末0.2g,置圆底烧瓶中,加入甲醇适量超声20min提取,以0.45μm微孔滤膜滤过至50mL量瓶中,流动相稀释至50mL,摇匀,备用.取不含阿西美辛的空白微囊,同法制备空白溶液.2.1.4.专属性考察：取阿西美辛空白溶液.对照品溶液.供试品溶液,以2.1.1项下色谱条件进行阿西美辛的含量测定,结果显示微囊辅料在阿西美辛相应的保留时间处未见吸收峰,表明所建立的含量测定方法专属性良好,色谱图见图1.图1高效液相色谱图Fig1HPLCchromatogramofAcemetacin2.1.5.线性关系考察：以流动相制备浓度为20.0.40.0.80.0.160.0.320.0.400.0.600.0μg/mL的对照品溶液,分别精密吸取上述溶液20μL注入HPLC,记录色谱图.以阿西美辛的峰面积(Y)与浓度(X)进行线性回归,计算回归方程为Y=34761X+768.56(r=0.9995,n=7).试验表明,阿西美辛检测浓度线性范围为20~600μg/mL.2.1.6.精密度试验：依照2.1.2项下制备对照品溶液,精密吸取对照品溶液20μL在当日重复测定6次,以测得的峰面积计算精密度,结果阿西美辛的RSD=1.27%(n=6),表明本实验精密度良好.2.1.7.稳定性试验：依照2.1.3项下制备供试品溶液,放置0.1.2.3.4.5.6.8.12.24h,且在相应时间精密吸取20μL进样测定,结果阿西美辛的RSD=1.55%,表明供试品溶液在24h内稳定性良好.2.1.8.样品含量测定：根据载药量精密称取微囊0.2g,依照2.1.3制备供试品溶液后HPLC法测定3批样品中阿西美辛的含量,结果3批样品中阿西美辛含量分别为标示量的98.5%.100.6%.99.3%.2.2.微囊的制备2.2.1.阿西美辛壳聚糖一海藻酸钠微囊的制备[6](1)囊材用量的预实验：囊材的用量对能否成囊.微囊形态及大小至关重要,通过预试验分别考察壳聚糖和海藻酸钠的用量,结果表明壳聚糖浓度为1%时不能成囊,2%或3%时能形成平均粒径为62μm和60μm的圆形微囊,无明显差别；海藻酸钠的浓度对成囊亦有较大影响,9%时微囊虽然能形成但相互之间有粘连现象,3%时生成的微囊呈均匀的圆形且无粘连现象,其他浓度时微囊的分布不均匀.剖析原因是壳聚糖和海藻酸钠的浓度均为3%时,两者的阴离子量和阳离子量基本相等,从而形成了较稳定的复合膜,有利于微囊的形成.最后确定两种囊材的用量均为3%.(2)空白微囊的制备：首先称取7.5g壳聚糖溶解于250mL蒸馏水,溶解过滤后静置过夜备用；另将7.5g海藻酸钠适量蒸馏水溶解后与0.6mol/L的氯化钙溶液混合使成混悬液约250mL,用作水相,滴入50mL市售植物油和2.5mLSpan一80乳化10min,制成油包水型乳化液,再滴加2%醋酸溶液适量使成凝胶微粒,加入上述壳聚糖溶液,磁力搅拌30min(速度600r/min),静置12h.石油醚去除油相,所得微囊先用石油醚洗3次,然后异丙醇洗涤3次,抽滤,50℃真空干燥,即得所需空白微囊.(3)含药微囊的制备：将阿西美辛原料过100目筛,精密称取1g与油包水型乳化液300mL混合均匀,25℃水浴加热,按上述制备空白微囊的方法制备含药微囊,即可制得阿西美辛载药微囊.2.2.2.制备工艺的优化：考察温度.搅拌时间和醋酸浓度对微囊的包封率的影响,结果见表1.(1)温度的影响：固定壳聚糖和海藻酸钠的浓度各为3%,醋酸浓度2%,搅拌速度为600r/min,搅拌时间为30min,考察三个水浴加热温度下微囊包封率的大小.(2)搅拌时间的影响：固定壳聚糖和海藻酸钠的浓度各为3%,醋酸浓度2%,搅拌速度为600r/min,水浴加热温度25℃,不同搅拌时间下微囊包封率的大小.(3)醋酸浓度的影响：固定壳聚糖和海藻酸钠的浓度各为3%,搅拌速度为600r/min,水浴加热温度25℃,搅拌时间30min,不同醋酸浓度时微囊包封率的大小.表1温度.搅拌时间和醋酸浓度对微囊包封率的影响结果Tab1Resultsoftemperature.churningtimeandaceticacidconcentrationonencapsulationefficiencyofacemetacinmicrocapsules从表1可以看出,温度不同包封率差异大,温度为25℃时包封率最高,50℃时包封率次之,这与温度升高时囊心扩散速度加快有关；搅拌时间为30min时包封率最高,10min时由于时间短,微囊尚未彻底完成,故包封率较低,而延长搅拌时间为60min时,包封率有所下降,这是因为30min时微囊已全部形成,继续搅拌由于机械搅拌的因素造成破囊,会引起包埋效果的下降；醋酸浓度为2%时包封率最高,浓度过低,囊材壳聚糖溶解不充分,囊壁无法顺利形成,增加醋酸浓度并不能提高微囊的包封率,且醋酸浓度过高会使囊材壳聚糖降解溶蚀使包封率有所下降.2.3.微囊的形态及粒径分布[7]:用带有标尺的电子显微镜观察微囊的形态,随机取样,每批不少于100个微囊,平行测定5次,并绘制粒径分布直方图,结果见图2.3.图2阿西美辛微囊电镜扫描照片(×500)Fig2Acemetacinmicrocapsuleformdiagramunderelectronmicroscope图3阿西美辛微囊粒径分布图Fig3Thesizedistributionofacemetacinmicrocapsules观察结果表明微囊外观形态圆整.表面光洁.分散性好不粘连,平均粒径为65.98μm(n=500),60~70μm的微囊占76.40%,大小均匀呈正态分布.2.4.微囊载药量和包封率的验证实验：精密称取0.1g阿西美辛微囊,用无水乙醇浸泡12h,然后将其置于磁力搅拌器中剧烈搅拌1h,过滤除去不溶物,用含有5%无水乙醇的磷酸盐缓冲液(pH=7.2)稀释至1000mL.以2.2.3项下方法制备供试品溶液后用HPLC法测定阿西美辛,并根据其标准曲线方程计算出其药物浓度,用下面公式计算微囊的载药量与包封率.结果见表2(n=3).表2阿西美辛微囊的载药量与包封率(n=3)Tab2Thedrugloadingcapacityandencapsulationefficiencyofacemetacinmicrocapsules(n=3)2.5.微囊体外释放度的比较[8]:取自制的阿西美辛微囊30mg和市售的阿西美辛胶囊,按我国药典2015年版四部溶出度测定法(转篮法)分别置于盛有900mL.pH6.8的磷酸盐缓冲液的溶出度仪转篮中,调节转速为100r/min,加热至缓冲液的温度恒定在(37±0.5)℃.分别于0.5.1.2.4.6.8.12.16.20.24h时吸取5mL释放液,并补加等量等温的空白缓冲液,释放液用0.22μm微孔滤膜滤过,测定,计算不同时间阿西美辛胶囊和阿西美辛微囊中药物的累积释药率,结果见图4.图4阿西美辛微囊和胶囊的体外累积释药曲线Fig4Cumulativereleaseofacemetacinmicrocapsulesandcapsulesinvitro由图4可知,阿西美辛微囊释药曲线前部分较陡直,释药较为迅速,释药曲线后部分逐渐平缓,释药速度放慢,累积释药量4h达52.65%,24h为93.61%,累积释放度随时间延长呈上升趋势,在体外有较好的缓释效果；而市售普通胶囊(囊材为明胶)体外释药曲线在各时间段内累积释放度均小于微囊,24h累积释药量为73.07%,两两相比具有明显差异(P<0.05).3.探讨目前,新的药物缓释.靶向给药剂型如脂质体.微囊.微乳剂.纳米粒等不断出现,近年来随着纳米技术的发展,微囊制剂以其缓释性.靶向性和增加药物溶解度等作用受到关注,药物制成微囊,可以掩盖药物的不良气味及口味,还能提高药物的稳定性,并会减少药物对胃的刺激,固化液态药物,以方便其使用,故其常应用于药剂.食品添加剂等领域[9].而且,药物以微囊为载体形式,可进一步制成片剂.胶囊剂.注射剂.眼用制剂.贴剂.气雾剂等应用于临床,有长时间维持稳定的血药浓度,以减少给药次数,从而减轻药物不良反应,提高药物生物利用度等优点[10].壳聚糖-海藻酸钠微囊制备方法有喷雾法和乳化法两类,乳化法主要有机械乳化法和膜乳化法两种.乳化法生产规模较大,可制备粒径较小的微囊,但粒径分布较宽,适合化学药物.蛋白和多肽等的微囊制备.本实验采用机械乳化法,又称内源乳化法,它是先将海藻酸钠溶液分散在钙盐溶液中,二价阳离子由外向内凝胶,然后分散到油相中,得到非均相微球,生成海藻酸钙凝胶微粒,海藻酸钙凝胶微粒再与壳聚糖溶液混合,经聚电解质络合反应,即可制成微囊[11].内源乳化法制备的微囊粒径分布较窄,表面光滑呈球形.壳聚糖与海藻酸钠为原料制备微囊,两种原料均是无毒,有良好的生物相容性,是可生物降解的天然高分子材料[12],原料易得定价便宜,生产过程简单.微囊的质量评价应包括包封率和载药量.体外释放度.形态及粒径分布等,包封率考察制备工艺对产品的影响,不同产品需要不同的载药量,合理的载药量需要结合制剂.药理等指标综合评价[13],本实验所得的阿西美辛微囊载药量及包封率高,原料利用率高,微囊的缓释效果和累积释放度优于市售普通片剂,以壳聚糖和海藻酸钠制备阿西美辛微囊是切实可行的.参考文献：[1]刘振华,金英,李忠思.HPLC法测定兔血浆中阿西美辛和吲哚美辛的浓度[J].河北医学,2014,20(3):353-355.[2]李忠思,王玉平,刘振华.阿西美辛分散片的制备及其溶出度评价[J].我国药房,2011,22(1):39-41.[3]SansoneF,PicernoP,MencheriniT,etal.Flavonoidmicroparticlesbyspraydrying:Influenceofenhancersofthedissolutionrateonpropertiesandstability[J].JFoodEng,2011,103(2):188-196.[4]胡荣,罗先钦,励娜,等.丹参酮缓释微囊的制备工艺探究[J].中草药,2012,43(11):2173-2176.[5]李忠思,张玲,王竹君,等.HPLC法测定阿西美辛分散片的含量[J].我国药房,2011,22(9):839-841.[6]何荣军,杨爽,孙培龙,等.海藻酸钠/壳聚糖微胶囊的制备及其应用探究进展[J].食品与机械,2010,26(2):166-173.[7]张艽,杨晓艳.盐酸小檗碱微囊口腔崩解片的制备与质量评价[J].中南药学,2014,12(5):1-5.[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2015版,北京：我国医药科技出版社,2015:121-123.[9]程亮,韩腾飞,李莎莎,等.盐酸青藤碱微囊的制备及其质量评价[J].中草药,2012,43(5):880-884.[10]严春临,张季,张丹参,等.大黄酚微囊药代动力学探究[J].时珍国医国药,2011,22(5):1127-1129.[11]史同瑞,刘宇,苏永福,等.壳聚糖-海藻酸钠微囊形成机理及制备方法探究进展[J].上海畜牧兽医通讯,2015,5(5):11-13.[12]阮心明,范春雷.青蒿油一壳聚糖缓释微囊的制备与质量评价[J].浙江中医药大学学报,2014,38(9):1098-1102.[13]董自亮,卢君蓉,高飞,等.芍药苷微囊的制备及其体外释药探究[J].中草药,2013,44(13):1756-1760.
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