[免费论文]不同产地大罗伞树不同部位的药学特性探究
打损伤(黄瑞松等,2015).文献记载,该属植物中主要含苯醌类.苯酚类和香豆精类化合物(江香梅等,2003),现已从该属6种植物中获得了岩白菜素(矮地茶素Bergenin),含量在0.52%~1.80%之间(刘姩等,1993).岩白菜素具有明显的止咳.抗炎.抗心律失常.抗病毒.护肝等作用(夏从龙等,2006;王刚等,2002).目前有关大罗伞树药材质量评价方法及该植物不同产地.不同部位药材岩白菜素含量的探究未见有报道,致使该药材质量控制欠缺,给临床用药和大罗伞树植物资源的开发利用造成技术瓶颈”.为此,本文采集了广西10批不同产地大罗伞树样品,采用TLC对不同产地大罗伞树进行鉴别实验,采用HPLC对不同产地全株和同一植株的地下部分(根及根茎).地上部分(茎枝及叶)样品进行岩白菜素含量测定,并进行质量剖析评价,为壮药大罗伞树质量标准的制订.临床用药和植物资源开发利用提供技术支撑.1.仪器与材料1.1仪器LC20AT高效液相色谱仪(二极管阵列检测器,日本岛津公司),LCSolution色谱工作站；SG2200HDT型超声波清洗器(功率190W,频率39kHz,上海冠特超声仪器有限公司)；XS2051/105电子天平(瑞士梅特勒公司)；EASYPUREII超纯水器(美国热电公司).1.2材料共采集10批不同产地的大罗伞树样品,详见表1.药材采收后除去杂质,洗净,切段,晒干.其中,1号.2号和5号的腊叶标本分别经广西中医药探究院赖茂祥探究员.广西中医药大学韦松基教授鉴定,均为紫金牛科植物海南罗伞树(Ardisiaquinquegona).岩白菜素对照品,批号为111532(我国食品药品检定探究院,供含量测定用,含量94.4%)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂,批号为20120812;烟台市化工探究所,批号为20120524)；TLC展开系统所用甲醇.乙醇.三氯甲烷.二氯甲烷.乙酸乙酯.甲酸均为剖析纯；HPLC流动相所用甲醇为色谱纯(默克股份两合公司)；水为自制超纯水.2.方法与结果2.1TLC鉴别2.1.1对照品和供试品溶液制备(1)对照品溶液制备：取岩白菜素对照品,加甲醇溶液制成每1mL含0.5mg的溶液,摇匀即得.(2)供试品溶液制备：取大罗伞树样品粉末0.3g于具塞锥形瓶中,加入甲醇5mL,超声处理30min,放冷,滤过,取滤液,即得.2.1.2TLC试验参照2015年版我国药典通则0502薄层色谱法方法进行试验,薄层板为硅胶G,点样量供试品溶液1~2μL.对照品溶液1μL,展开剂为二氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸(4∶1∶0.7∶0.5),展距8cm,显色剂为2%三氯化铁乙醇溶液1%铁氰化钾溶液(1∶1)混合溶液,在可见光下检视.结果显示,10批大罗伞树供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应的位置上均显示灰蓝色斑点,且Rf值适中,斑点集中清晰,重现性好(图1).2.1.3耐用性实验考察(1)薄层板的考察：分别对青岛海洋化工厂(批号20120812)和烟台市化工探究所(批号20120524)两个厂家生产的预制板进行层析效果考察.(2)展开温度的考察：分别对8℃和25℃两种不同展开温度进行层析效果考察.(3)展开相对湿度的考察：分别对65%和80%两种不同展开相对湿度进行层析效果考察.(4)不同点样方式的考察：分别对点状点样和条带状点样进行层析效果考察.以上结果显示,在上述各试验条件下大罗伞树的TLC效果均较好,表明本试验建立的大罗伞树TLC鉴别方法的耐用性良好.2.2含量测定2.2.1色谱条件色谱柱为SinoChromODSBPC18(250mm×4.6,5μm),流动相为甲醇水(23∶77),流速1.0mL·min1,柱温25℃,进样量为对照品和供试品溶液均为10μL,检测波长为275nm.2.2.2对照品.供试品和阴性溶液制备(1)对照品溶液制备：精密称定岩白菜素对照品适量,加入甲醇溶液制成浓度约为100μg·mL1的溶液,即得.(2)供试品溶液制备：取本样品粉末(过4号筛)约0.2g,精密称定,置50mL具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇溶液25mL,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,即得.阴性对照溶液：50%乙醇溶液.2.2.3专属性试验精密吸取2.2.2项下的对照品.供试品和阴性对照溶液各10μL,按2.2.1项下的色谱条件进样测定.结果发现,供试品溶液色谱图中有岩白菜素对照品吸收峰,阴性对照溶液则无此吸收峰.说明本方法测定大罗伞树中岩白菜素含量专属性强,无阴性干扰(图2).2.2.4仪器最低检测限和定量限分别取岩白菜素甲醇溶液(约0.5μg·μL1)进行稀释,以S/N=3时注入液相色谱仪的浓度作为检测限,以S/N=10时注入仪器的浓度作为定量限.结果发现,岩白菜素的检测限为1.6ng,定量限为11.2ng.2.2.5方法学验证2.2.5.1岩白菜素线性关系考察精密称取岩白菜素对照品适量,加甲醇制备成0.531mg·mL1的溶液,备用.分别精密吸取上述对照品溶液0.2.1.0.2.0.3.0.4.0mL,各以甲醇定容至5mL,摇匀.分别精密吸取上述对照品溶液各10μL进样测定,纵坐标(Y)为峰面积积分值,横坐标(X)为进样量(μg),进行标准曲线绘制,计算回归方程.回归方程为Y=1324645.67X+4961.78,r=0.9999.说明岩白菜素在0.2122~5.3053μg范围内与峰面积呈良好线性关系(图3).2.2.5.2精密度试验(1)重复性试验：取同一供试品溶液(8号样品),重复进样测定5次,测定峰面积值.结果发现,5次测定岩白菜素峰面积的平均值为1916498,RSD为0.12%.(2)重现性试验：照2.2.2项方法,平行制备6份同一批样品(8号样品)供试品溶液,分别进样测定.结果发现,6份供试品溶液岩白菜素平均含量为1.98%,RSD为1.19%.2.2.5.3稳定性试验取同一供试品溶液(8号样品),分别于0.2.4.6.8和24h时进样测定.结果发现,24h内6次测得的岩白菜素峰面积的平均值为1975312,RSD为0.60%.2.2.5.4准确度试验采用加样回收试验方法进行,分别取已知含量的同一批样品(8号)制备供试品溶液6份,制备方法参考2.2.2项中的供试品溶液制备”,但样品取样量为0.1g,提取溶剂为含岩白菜素的50%乙醇溶液(岩白菜素浓度为72.2μg·mL1)；测定方法参照2.2.1项.结果发现,岩白菜素平均回收率为101.08%,RSD为1.69%(表2).2.2.5.5耐用性试验(1)色谱柱的考察：在相同的色谱条件下,分别采用赛芬SapphireC18柱.菲罗门公司GeminiC18柱和依利特公司SinoChromODSBPC18三根不同品牌的色谱柱(规格均为5μm,4.6mm×250mm),测定同一供试品溶液(8号样品)岩白菜素含量.结果发现,三根色谱柱测定的岩白菜素含量平均值为1.99%,RSD=2.29%(n=3).(2)色谱仪的考察：在相同的色谱条件下,分别采用岛津LC20AT和Waters2695两台不同品牌的色谱仪,测定同一供试品溶液(8号样品)岩白菜素含量.结果发现,两台色谱仪测定的岩白菜素含量平均值为1.93%,RSD=0.29%(n=2).结果表明,本探究建立的HPLC测定大罗伞树中岩白菜素含量的方法对上述不同的色谱柱和仪器具有良好的耐用性.2.2.6样品测定分别取岩白菜素对照品.10批样品的全株.地下部分和地上部分,照2.2.2项方法制备对照品和供试品溶液,照2.1项色谱条件测定岩白菜素含量.结果发现,10批样品以药材干燥品计算,岩白菜素含量全株为0.95%~2.58%,平均含量为1.67%;地下部分为2.23%~6.29%,平均含量为4.05%;地上部分为0.70%~2.44%,平均含量为1.21%(表3).3.探讨与结论大罗伞树为壮族民间常用的壮药,来源于紫金牛科紫金牛属植物海南罗伞树.过去人们对紫金牛属药用植物的探究多集中在朱砂根.紫金牛.红凉伞.酸苔菜等药材上(李萍萍等,2009),对大罗伞树的探究则甚少,特别是对其药材的鉴别和有效成分的测定未见报道,致使该药材质量缺乏评价和控制的指标,严重影响了该药材临床用药的安全有效和开发利用.过去的探究表明,紫金牛属植物多含有岩白菜素,岩白菜素具有显着的药理活性,以其作为紫金牛属植物的有效成分或特征成分进行测定剖析具有重要的意义.在本探究的TLC鉴别方法中,我们对比甲醇和乙醇两种不同溶剂准备的供试品溶液进行了比较,结果以甲醇作为溶剂较乙醇作为溶剂层析斑点清晰,因此选用甲醇为提取溶剂；曾对正丁醇冰醋酸水(3∶1∶1).二氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸(4∶1∶0.7∶0.5)和三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸(4∶1∶1∶1.5)等不同展开剂系统进行摸索,结果发现,前者展开效果欠佳,后两者展开效果较好,斑点集中,Rf值适中.但考虑到三氯甲烷毒性较大,故本试验选用二氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸(4∶1∶0.7∶0.5)作为展开剂.经方法学验证,表明本探究建立的大罗伞树药材岩白菜素含量测定方法,专属性强.重现性高.耐用性良好,且该方法操作简便,可作为壮药大罗伞树药材岩含量测定方法.供试品溶液制备中,分别对不同溶剂(甲醇.50%甲醇.乙醇.50%乙醇)和不同提取方法(加热回流和超声处理)进行考察.结果发现以50%乙醇超声提取岩白菜素得率最高.故供试品溶液制备方法初步确定采用50%乙醇超声处理.为此,进一步采用正交设计方法对提取方法条件进行优化,对药材取样量.破碎度和超声提取时间三因素三水平进行考察.根据结果最终确定本品供试品溶液制备方法的条件为药材取样量约0.2g,药材破碎度为过四号药典筛的粉末,超声提取时间为30min.由表3可知,不同产地大罗伞树药材岩白菜素含量有一定差异,其中含量最高的是采集于芩溪县波塘镇的4号样品,岩白菜素含量达2.58%,含量最低的是采集于钦州市钦北区的6号样品,含量为0.95%;同一个地区不同区域采集的样品含量也有所不同,如采集于融水县的1号样品含量为1.85%,3号样品则为2.41%.因此,对大罗伞树药材进行岩白菜素含量测定,对于控制该药材质量显得尤为必要.建议有关部门尽早制订壮药大罗伞树质量标准,并将该药材岩白菜素含量测定项收入标准.壮族民间使用大罗伞树常以全株入药用.本探究结果表明,该植物不同部位均含有岩白菜素,其中全部样品含量均是地下部分(根及根茎)显着高于地上部分(茎枝及叶),平均含量前者是4.05%,后者是1.21%,但从充分利用资源考虑,以全株入药具有一定的科学道理.参考文献：HUANGRS,2015.Zhuangmedicineedition(Vol.Ⅰ)[M].Nanning：GuangxiScienceandTechnologyPress：289.[黄瑞松,2015.壮药选编(上册)[M].南宁：广西科学技术出版社：289.]JIANGXM,YEJS,XINGWR,2003.IntroductiontomedicalandhorticulturalvaluesandresearchprogressofArdisiaspecies[J].JiangxiForSciTechnol,(5)：30-33.[江香梅,叶金山,幸伟荣,2003.紫金牛属植物的药用.观赏价值及其探究进展[J].江西林业科技(5)：30-33.]LIUN,LIY,GUOJX,etal,1993.StudesonthetaxonomyofthegenusArdisia(Myrsinaceae)formChinaandtheoccurrenceandquantityofBergenininthegenus[J].ActaAcadMedShanghai,20(1)：49-53.[刘姩,李颖,郭济贤,等,1993.我国紫金牛属的分类及其岩白菜素的含量[J].上海医科大学学报,20(1)：49-53.]LIPP,YANGCS,ZENGYH,2009.AdvancesinstudiesonresourcesformedicinalsourceplantswithBergenin[J].ChinTradHerbDrugs,40(9)：1500-1505.[李萍萍,杨超生,曾云恒,2009.岩白菜素药源植物资源探究进展[J].中草药,40(9)：1500-1505.]WANGG,MABJ,2002.TheresearchsituationofBergenin[J].JAnhuiTradChinMedColl,21(6)：59～61.[王刚,麻兵继,2002.岩白菜素的探究概况[J].安徽中医学报,21(6)：59-61.]XIACL,LIUGM,MAXK,2006.ResearchprogressofBergenin[J].LishizhenMedMatMed,17(3)：432-433.[夏從龙,刘光明,马晓匡,2006.岩白菜素的探究进展[J].时珍国医国药,17(3)：432-433.]
原文链接：http://www.jxszl.com/lwqt/mflw/21938.html
