口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的人兽共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，危害波及全世界，需要人类共同预防和研究。本研究拟通过青蒿素佐剂（A2）和猪口蹄疫（FMDV）灭活疫苗共同免疫小鼠，来评价该佐剂的效价性和增强性。实验利用小鼠的试验模型进行体内免疫评价，使用了在相同饲养条件下同种注射方式注射不同量佐剂剂量，以及在相同FMDV抗原灭活病毒的剂量下，疫苗皮下注射多次免疫小鼠，眼眶采血分离血清,采用间接ELISA测定血清IgG以及粪清IgA抗体，评价免疫效果。试验结果显示，FMDV灭活疫苗二免28天后，可以产生抗体，但是青蒿素佐剂免疫血清中IgG抗体滴度相对于只注射FMDV灭活苗组并未出现显著升高，二免28天粪清中的IgA滴度未检测出。本实验显示FMDV二免28天后，可以产生抗体，但是青蒿素免疫佐剂并没对FMDV灭活苗效价并没有显著提升，其免疫增强效果有待进一步研究。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
1引言3
2 材料与方法4
2.1 试验材料 4
2.1.1 佐剂成分4
2.1.2 实验动物4
2.1.3 疫苗4
2.1.4 实验试剂5
2.1.5 实验仪器5
2.2 实验方法 5
2.2.1 小鼠称重4
2.2.2 灭活疫苗免疫方法5
2.2.3血清采样6
2.2.4 粪清采样6
2.2.5 血清（粪清）抗体水平的测定6
2.2.6 数据处理7
3 结果分析 7
3.1小鼠体重7
3.2免疫后抗体水平测试 8
4 讨论11
致谢11
参考文献12
青蒿素佐剂对于灭活FMDV免疫效果的影响
引言
1 引言
口蹄疫 (FOOTANDMOUTH DISEASE, FMD) 属于A类疾病，易感动物多达70余种。接种灭火疫苗是现今预防此病的主要方法，制备灭活疫苗中佐剂起着非常重要的作用 [45] 。佐剂（免疫佐剂或免疫调节剂）在免疫中 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
的作用主要是提升机体免疫系统对抗原或免疫原的免疫应答方应，包括真能抢免疫反应强度和反应的持久性。
佐剂作为疫苗产品的关键成份之一，直接影响疫苗免疫的效果 [6] 。佐剂又叫免疫增强剂，是先于抗原或与抗原同时应用，能增强机体对抗原非特异性免疫应答能力的物质 [7] 。多年来试验研究证实，添加佐剂可以辅助抗原增强它们免疫应答的能力，其对疫苗的免疫效果有正向帮助作用 [8] 。
与国外相比，我国兽医界在此方面的研究相对滞后。目前我国兽用生物制品灭活疫苗佐剂主要有两种：轻质矿物油和铝胶。铝胶虽然安全，但对于大多数病毒类产品效果一般；轻质矿物油虽然佐剂效果显著,但动物接种后副反应比较严重，而且其中含有的稠环芳烃对于人类的健康有间接的损害 [9] 。因此目前广泛使用的矿物油应该被重新评价。
目前国外已经试验的佐剂有100 多种，按照佐剂作用方式可分为：免疫调节作用(诱导抗原提呈细胞(APC)分泌不同的细胞因子，如γ干扰素( IFNγ) 、白细胞介素2 ( L2 ) 、肿瘤坏死因子α( TNFα) 、白细胞介素4、5、10、13 ( L4、5、10、13) 、抗原提呈作用(佐剂保持抗原构象的完整并提呈给适当的免疫效应细胞) 、诱导CD8+ 细胞毒性T细胞(CTL )应答、靶向作用（佐剂激发APC摄取和传递抗原,进而向免疫效应细胞提呈抗原的能力）和抗原储存作用(将抗原短期或长期储存在注射部位免受肝脏清除)。根据佐剂的成分可分为矿物盐佐剂、油佐剂、微生物类产品、皂苷类和化学合成物质等五类 [1012]。
由于现代科学技术的发展，各种新型疫苗的研究不断深入。一方面可以通过进一步精制矿物油，彻底清除其中的致癌成分稠环芳烃，另一方面可以用一种新型可代谢的矿物油及其相应的乳化剂配方,这是一种更安全的方向 [1314] 。
国内的兽医生物制品科研人员可以借鉴国外同类研究成果，关注微生物多糖、DMP 和ISCOMs等的开发应用[15] 。对于可以增强粘膜免疫的佐剂,适当改变接种途径可能会对某些疾病的防治带来意外的效果[16] 。研究结果可为疫苗研发提供一定参考。
2材料与方法
2.1试验材料
2.1.1佐剂成分
2.1.1.1佐剂
青蒿素A2，由本实验室提供
2.1.2实验动物
5周龄BALB/c小鼠60只。购于扬州大学医学院。
2.1.3疫苗
2.1.3.1灭活病毒抗原
猪口蹄疫灭活病毒抗原FMDV：由江苏省农业科学院兽医所研制。
2.1.4主要试剂
HRP羊抗鼠IgG：武汉博士德生物工程有限公司；
HRP兔抗鼠IgA：武汉博士德生物工程有限公司；
佐剂(佐剂2)青蒿素：本实验室提供；
DMSO,PBST,试剂成分由江苏省农业科学院兽医所提供。
2.1.5主要仪器
超净台，由江苏省农业科学院兽医所提供；
DNP9052型电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司；
ELx800吸光酶标仪，美国伯腾仪器有限公司；
Thermo Scientific SL16R台式冷冻离心机，美国Thermo Scientific公司；
2.2试验方法
2.2.1 小鼠称重
小鼠于免疫前开始，每隔7天称一次重。
2.2.2灭活疫苗免疫方法
将5周龄的BALB/c小鼠随机分成7组，每组8只，加上对照组分笼编号为1，2，3，4，5，6，7。第7组作为阴性对照，其余6组作为实验组。按照1μg/只的病毒蛋白量与FMDV灭活抗原混合制成疫苗。对前6组进行灭活疫苗免疫。取猪口蹄疫FMDV灭活疫苗（25μg/ml)用无菌PBS稀释成 1μg/ml，用一个空的无菌TP试剂管大约50ml装入已稀释好的灭活溶液，此为48只小鼠（每只进行100μg肌肉注射）一次免疫的剂量，每只动物免疫100 μl。注射方式为背部皮下注射。每只小鼠免疫1次，于首次免疫后，时隔24小时再次免疫该病毒抗原。根据14天（第一次免疫后的2个星期）抗体水平，决定二免否。90d后小鼠处死。
表1 实验分组
Table 1 Experiment Grouping
序号

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