为探讨碲化镉对雄性小鼠生殖的影响，将27只雄性小鼠随机分为3组，采用眼眶注射的方法分别注射碲化镉0、0.2和2nmol，饲养1d、30d、90d 后，处死小鼠，摘取睾丸制作石蜡切片，应用HE染色法检测小鼠睾丸组织形态，应用IHC检测血睾屏障连接蛋白的定位及表达情况。结果显示，0.2和2nmol剂量的碲化镉会破坏小鼠睾丸组织形态，导致支持细胞空泡化，生精上皮受损变薄，并影响连接蛋白 Connexin-43以及Occludin的表达。该结果为进一步研究碲化镉对雄性小鼠生殖毒性的分子机制提供试验依据。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1研究材料 4
1.1.1主要仪器4
1.1.2 主要试剂4
1.2研究方法 4
1.2.1 实验分组4
1.2.2 样品处理4
1.2.3 HE染色5
1.2.4 IHC染色5
2 结果与分析6
2.1 HE染色结果分析6
2.2血睾屏障连接蛋白Connexin43的免疫组化分析7
2.3血睾屏障连接蛋白Occludin的免疫组化分析9
3 讨论10
3.1碲化镉对睾丸形态的影响10
3.2碲化镉对睾丸连接接蛋白Connexin43和Occludin表达的影响11
致谢11
参考文献12
碲化镉对小鼠血睾屏障连接蛋白表达的影响
引言
量子点（Quantum Dot）是半导体纳米晶体（Semiconductor nanocrystals）的一种，由II－VI族或III－V族元素组成，其结构包括半导晶体核心和外壳。多种金属与非金属形成的化合物位于量子点核心部分[1, 2]。
由于量子点材料具有纳米特性，与常规材料相比较，量子点材料的优势体现在光吸收、催化、敏感特性和磁性等诸多方面，在医学工业和军事领域得以广泛应用，是目前使用较为广泛的半导体材料，应用较多 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
的的量子点有磷化铟、砷化铟、砷化镓、硫化锌、硒化锌、硒化镉和碲化镉等。但最近的研究表明，量子点纳米材料已经明显影响了雄性小鼠和男性的生殖健康[1,2]。因此，对纳米碲化镉等量子点材料的毒性研究和评价也愈加紧迫。但由于量子点材料的特殊理化性质，导致其展现出了新的毒性，是因为同传统材料相比，它更易透过生物膜，更易与生物大分子反应；不同粒径、不同晶型的纳米材料也会呈现不同的生物学特性，这增加了对其毒理学评价的困难[3]。且目前关于碲化镉对生殖的作用还研究较少。近期有研究表明，碲化镉已经对睾丸组织产生了氧化损伤，如韩莹等（2010）研究表明碲化镉量子点染毒可导致小鼠睾丸组织氧化损伤，且其损伤程度与染毒时间之间具有一定的时间效应关系 [4]。也有研究表明，同样是量子点材料的硒化镉对精子质量也产生了不利影响。徐厚君等（2010）研究表明纳米硒化镉随着可溶性的升高，精子存活率增高，精子畸形率显著降低[3]。
只有在血睾屏障、内分泌、免疫等多个系统协调统一地参与调控的前提下，精子才可以正常发生，且精子的发生会因其中任何一个环节的缺失而出现异常。其中血睾屏障的作用极为关键[58]。血睾屏障（Bloodtestis barrier）主要是由曲细精管中的大量支持细胞紧密连接构成。在支持细胞（Sertoli Cell）中，紧密连接（Tight junction）对形成血睾屏障起决定性作用；黏附连接（Adherens junction）可以将细胞与细胞之间以及细胞的肌动蛋白骨架相互连接起来，并且能够结合许多的细胞信号分子 [9]；缝隙连接（Gap junction）可以使细胞间进行信息和能量物质的交换，是维持内环境稳定、细胞增殖和分化等调控机制中的主导性因素，在介导细胞间隙连接通讯的过程中起关键作用[10]。Occludin和ZO1等蛋白构成了紧密连接，Ncadherin等蛋白构成了黏附连接， Connexin43等蛋白构成了缝隙连接。支持细胞间的连接结构可能会因为外源性化学物质的影响而解体，具体表现为血睾屏障结构和功能受到破坏，进而引起生殖细胞的损害[11]。当生殖系统受到有害物质的污染后，Occludin、Connexin43、ZO1以及Ncadherin等蛋白的表达会发生异常，使血睾屏障受到干扰，导致化学物质更容易侵入生精上皮，最终引发生殖系统的毒性效应[12, 13]。
为明确碲化镉是否对雄性小鼠睾丸形态产生影响以及碲化镉是否对雄性小鼠血屏
障连接蛋白中的紧密连接蛋白Occludin和缝隙连接蛋白Connexin 43表达造成影响，本课题应用HE染色方法以及免疫组织化学检测手段，研究碲化镉对雄性小鼠生殖机能影响的可能机制，探讨纳米碲化镉这种量子点材料对雄性生殖的影响，为进一步研究量子点对小鼠及人类雄性生殖方面的毒害作用提供研究基础，为量子点材料的推广应用提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 研究材料
1.1.1 主要仪器
组织包埋仪、组织切片、水浴锅、摊片机、制冰箱、光学显微镜。
1.1.2 主要试剂
二甲苯、乙醇、去离子水、兔抗Cx43、兔抗Occludin、SABC、二抗、BSA、磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline, PBS）、伊红、苏木素、疫组化检测试剂盒(DAB mouse)、柠檬酸纳、甲醇、过氧化氢。
1.2 研究方法
1.2.1 试验分组
27只雄性小鼠，随机分为3组，每组9只，第一组为对照组，第二组采取眼眶注射的方法注射碲化镉0.2nmol，第三组采取眼眶注射的方法注射碲化镉2nmol，每组又分为三小组，分别在饲养1d、30d、90d后处死，摘取小鼠睾丸，多聚甲醛溶液固定备用。
1.2.2 样品处理
参照本实验室的方法[14]，具体步骤如下：
1）脱水
70%乙醇1h→85%乙醇1h→95%乙醇1h→100%乙醇Ⅰ30min→100%乙醇Ⅱ30min→100%乙醇Ⅲ过夜
2）透明
50%乙醇+50%二甲苯混合液 30min→二甲苯Ⅰ1h→二甲苯Ⅱ40min
3) 浸蜡
50%二甲苯+50%石蜡混合液1h→石蜡Ⅰ1h→石蜡Ⅱ真空过夜
4）包埋
将预先融化好的石蜡注入金属框，待底面石蜡稍微凝固时，用温镊子夹取睾丸组织块放入金属框的中央，待稍凝，放入预备好的标签纸，然后将金属框快速全部浸入冰水中，待石蜡全部变硬后即取出，剥出蜡块。
5）切片
修正蜡块，进行切片，切片厚度为4 (m。将切好的切片放入38 ℃水浴锅中进行展片后用黏片剂处理的载玻片捞起。烘片机设置为38 ℃，烤片过夜后，收放于切片盒以备染色。

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