禽流感和新城疫是危害养禽业发展的传染病。如今，禽流感和新城疫混和感染发病率高，且无较有效的治疗手段，主要采取的是接种疫苗的防范措施。但大多数疫苗都需要免疫增强剂来提高免疫效力，且病毒重组变异能力强。因此一个安全、广谱、高效的免疫增强剂是当前研究的热点。近年来，不断有活性肽物质从法氏囊中提取出来，且证实其有一定的免疫增强作用。本研究选取了一种新型的法氏囊五肽（BP-3），设计了三种不同的浓度，通过测定其免疫后血清抗体水平和免疫细胞的活性来探究其对禽流感新城疫二联苗免疫效果的影响。实验结果显示这种法氏囊五肽能较好提高二联苗免疫的抗体水平，且能促进淋巴细胞的活性，并能提高树突状细胞的共刺激分子和表面因子的表达量。实验表明这种法氏囊五肽具有很好的免疫增强作用，为研究开发新型疫苗免疫增强剂提供了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1□材料与方法2
1.1□材料 2
1.1.1□病毒 2
1.1.2□实验动物 2
1.1.3□实验材料 3
1.2□方法 3
1.2.1□多肽的制备3
1.2.2□多肽对二联苗的响3
2□结果分析4
2.1□多肽的制备4
2.2□多肽对二联苗的影响 5
3□讨论 8
致谢9
参考文献10
图14
图25
图35
图46
图56
图67
图77
图88
图98
一种法氏囊五肽调节禽流感和新城疫二联疫苗的作用初步研究
引言
引言 禽流感（Avian influenza, AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）引起的一种疾病综合征[1]。禽流感不仅会对养禽业造成严重危害，而且还对禽类食品造成潜在的危险，从而危害到人类的生命健康[2]。禽流感病毒根据致病力和毒力的差异分为无致病性、低致病性和高致病性[3]。高致病性禽流感有着高 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
致病性、高发病率、高死亡率的“三高”特性，会对养殖业造成极其严重的危害。目前，防治禽流感还没有较有效的方式，接种疫苗仍然是最有效的措施[4]。如今应用到实际预防中的禽流感疫苗大多数为灭活疫苗，虽然安全性得到了保障，但有时不能达到预期的免疫效果[5]。因为禽流感病毒具有遗传多样性且发生重组的概率很高，目前使用的疫苗普遍只能对特定毒株的禽流感毒具有免疫力，一旦有新的禽流感病毒毒株或亚型出现，原有疫苗将会失去其免疫力。因此，研制出一种具有诱导广泛交叉反应免疫应答的广谱禽流感疫苗具有特别重要的意义。
新城疫（Newcastle Disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）引起的一种禽类热性、急性、败血性和高度接触性传染病[6]。禽类感染新城疫以呼吸困难、高热、神经紊乱、下痢、黏膜和浆膜出血为特征。OIE将其列为A类疫病。各地区采取的防治新城疫病毒的措施不尽相同，除了捕杀和紧急接种，大多数都采取接种疫苗的方式来防治新城疫。现采用的新城疫疫苗多为油乳剂灭活苗，其生产多利用LaSota及Rokin等毒株。新城疫灭活疫苗通常和其他灭活苗一起制成二联苗或多联疫苗，并通常需要添加佐剂。但使用灭活苗免疫可能会造成机体产生对抗新城疫病毒的特异抗体，从而对疾病的监控造成影响[7，8]。而使用活疫苗时，母源抗体会使初次免疫的效果受到影响；同时存在因为环境和机体抵抗力等因素造成并发感染。活疫苗在制备过程中由于不易控制可能存在毒力增强的可能，从而造成免疫的失败。为控制新城疫病毒的传播流行，新型疫苗研究如今成为热点。
为了应对禽流感和新城疫的传播与流行，世界各地主要采取接种疫苗的措施，使用的主要为灭活疫苗。现如今应用到实际使用中的疫苗已达到20多种，且疫苗毒株仍在不断更新。但是禽类在接种疫苗后仍有发病的可能性，如今亟需解决的问题是如何提高疫苗的免疫水平。疫苗的免疫水平的高低主要受抗原的免疫原性、疫苗接种剂量、接种疫苗的方式、疫苗的佐剂、机体状态等影响[9]。其中佐剂的作用比较重要，佐剂作为一种非特异性的免疫效果增强剂，常同抗原同时或提前注入机体内，佐剂可通过改变机体的免疫应答类型从而进一步提高机体对抗原的免疫应答[10]。在疫苗中添加佐剂可以增强疫苗的免疫效果，研发新型免疫佐剂从而提高免疫效果是当前研究的主要方向。
法氏囊被世界公认为是禽类体液的中枢免疫器官，相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。已经证实法氏嚢组织中存在一些免疫调节因子。近年来，随着科学研究的不断深入，尤其是质谱技术在蛋白质分离和鉴定方面的广泛应用，不断从法氏囊组织中分离鉴定出多种活性肽[1113]。研究表明，法氏囊活性肽能提高机体的免疫能力，使其具有很大的应用前景。因为法氏囊活性肽具有免疫调节功能并且表现出免疫佐剂潜能，所以可以与疫苗或疫苗制剂等结合使用从而提高疫苗的免疫效果。还可以将法氏囊活性肽与其它药剂如抗肿瘤制剂、抗氧化制剂等结合，来治疗一些与机体过氧化和肿瘤相关的疾病。
法氏囊活性五肽(Bursopentine，BP3)是新分离出的一种多功能法氏囊活性肽，BP3不仅能够促进淋巴细胞发育，调节机体体液免疫和细胞免疫反应，还具有抗氧化功能，而且在抗肿瘤方面也具有一定的活性[1416]。实验室对法氏囊多肽有多年的研究，但对于法氏囊五肽（BP3）的研究还不够完善，作为新发现的法氏囊活性肽，对于其潜在的免疫特性和使用剂量方面仍然需要进一步的探索。本试验拟研究BP3对禽流感新城疫二联苗免疫效果的作用，通过比较不同浓度的法氏囊五肽对二联灭活苗的免疫效果的影响，为开发法氏囊多肽免疫佐剂或疫苗增强剂提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 病毒
本试验所用到的H9N2亚型禽流感病毒、新城疫病毒为大学动物医学院保存。
1．1．2 实验动物
BALB/C小鼠50只，购于扬州大学实验动物中心。
1．1．3 实验材料

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